塞内卡病毒-3A负标记病毒的构建方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种塞尼卡病毒‑3A负标记病毒的构建方法及其应用，以塞内卡病毒cDNA全长感染性克隆重组质粒pCMV‑rSVA‑SD作为框架，构建含3A蛋白部分缺失的SVA全长cDNA克隆重组全长质粒，再将所述的重组全长质粒转染BHK‑21细胞进行病毒拯救获得塞尼卡病毒A‑3A负标记病毒；所述的3A蛋白部分缺失为3A蛋白4‑9位、76‑82位或80‑87位氨基酸缺失。本研究构建的3A蛋白负标记病毒为后续发展塞内卡病毒A鉴别诊断疫苗的候选毒株奠定实验基础。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物免疫，具体涉及一种塞内卡病毒-3a负标记病毒的构建方法及其应用。

技术介绍

1、塞内卡病毒a(senecavirus a，sva)，又称为塞内卡谷病毒(seneca valleyvirus，svv)。最近国内外猪群中新流行的病原，对于养猪业产生较大的威胁。我国是养猪大国，也是最大的生猪生产基地，所以一旦有新的疾病的爆发如果不能加以制止，可能会对我国的养猪业产生巨大的影响，并且造成不小的经济损失。随着对塞内卡病毒a研究深入，发现在sva基因组中可以表达外源基因片段。本文通过对sva的基因组进行突变和插入，而达到获得新型产品用于应用的目的。

2、目前，已经有许多研究人员使用各种不同方法来研究病毒标记问题。其中，常用的技术是利用融合蛋白或直接修改病毒基因组进行标记。这些技术虽然可以对病毒进行精确定位，但也存在一些缺点，例如标记会影响病毒的功能和稳定性，无法对所有类型的病毒进行标记等。同时也存在构建表位突变病毒的技术，这种技术可以在不影响病毒结构和功能的情况下，通过在病毒基因组上的部分基因的突变，精确的标记病毒。虽然该技术能够为病毒定本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种塞内卡病毒-3A负标记病毒的构建方法，其特征在于，以塞内卡病毒cDNA全长感染性克隆重组质粒pCMV-rSVA-SD作为框架，构建含3A蛋白部分缺失的SVA全长cDNA克隆重组全长质粒，再将所述的重组全长质粒转染BHK-21细胞进行病毒拯救获得塞内卡病毒-3A负标记病毒；所述的3A蛋白部分缺失为3A蛋白4-9位、76-82位或80-87位氨基酸缺失。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，构建含3A蛋白部分缺失的SVA全长cDNA克隆重组全长质粒的过程为：以质粒pEASY-SVA-B为模板，设计引物分别扩增得到P1片段和P2片段，将P1和P2片段进行融合得到融合片...

【技术特征摘要】

1.一种塞内卡病毒-3a负标记病毒的构建方法，其特征在于，以塞内卡病毒cdna全长感染性克隆重组质粒pcmv-rsva-sd作为框架，构建含3a蛋白部分缺失的sva全长cdna克隆重组全长质粒，再将所述的重组全长质粒转染bhk-21细胞进行病毒拯救获得塞内卡病毒-3a负标记病毒；所述的3a蛋白部分缺失为3a蛋白4-9位、76-82位或80-87位氨基酸缺失。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，构建含3a蛋白部分缺失的sva全长cdna克隆重组全长质粒的过程为：以质粒peasy-sva-b为模板，设计引物分别扩增得到p1片段和p2片段，将p1和p2片段进行融合得到融合片段，并将融合片段克隆至peasy-simple-blunt载体中，待片段测序正确后，利用mlu i/aflii酶切替换至pcmv-rsva-sd全长感染性克隆重组质粒中，构建含3a蛋白部分缺失的sva全长cdna克隆重组全长质粒。

3.根据权利要求2所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：白娟，温家成，李亮，姜平，王先炜，
申请(专利权)人：南京农业大学，
类型：发明
国别省市：