替换PgsBC来源改变聚谷氨酸产量和分子量的方法技术

本发明专利技术将地衣芽孢杆菌的γ‑聚谷氨酸合成酶基因簇pgsBCA克隆至一株高产谷氨酸的谷氨酸棒杆菌F343中进行外源表达，在此基础上，将pgsBC替换为其他菌株来源的pgsBC，分别是枯草芽孢杆菌或甲基营养型芽孢杆菌，得到重组菌株B'(BS)C'(BS)A或B'(BM)C'(BM)A，与对照菌株B'(BL)C'(BL)A产生γ‑PGA的最大分子量6693.689kDa相比，异源表达BS和BM来源的PgsBC蛋白能产生更高分子量的γ‑PGA，分别为25657kDa、16741kDa。因此替换PgsBCA多蛋白复合体中PgsBC的来源是改变γ‑PGA分子量的有效方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及合成生物学和发酵工程领域，具体是单独替换pgsbca多蛋白复合体中pgsbc的来源，促进不同分子量γ-pga的合成。

技术介绍

1、γ-聚谷氨酸(γ-pga)是一种由l-谷氨酸和d-谷氨酸单体聚合成的生物聚合物，具有水溶性高、良好的生物降解特性、较强的增稠能力等性质，对金属离子具有优异的吸收性和结合能力。近年来，γ-pga广泛应用于食品、化妆品、生物医学、环境保护等领域。

2、目前，微生物发酵是生产商业γ-pga的主要方法，因为它具有原料廉价，环境污染少，天然产物纯度高等优点。主要的γ-pga生产菌株是芽孢杆菌属，根据生产过程中，是否需要额外添加谷氨酸作为前体，γ-pga生产菌株可以分为两种类型，即谷氨酸依赖型菌株和谷氨酸非依赖型菌株。有学者先后选择e.coli和c.glutamicum为底盘细胞，通过异源表达γ-pga合成酶，在无需谷氨酸添加的条件下成功实现了γ-pga的合成，但其产量不高。

3、γ-pga合成酶pgsbca由pgsb、pgsc和pgsa基因编码，负责催化谷氨酸合成γ-pga。γ-pga的合成能力受γ本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种γ-PGA合成酶的基因簇pgsB'C'A，其特征在于，所述基因簇pgsB'C'A中，合成酶基因pgs B'、pgs C'的核苷酸序列包括如下任意一种：

2.根据权利要求1所述的γ-PGA合成酶的基因簇pgsB'C'A，其特征在于，所述基因簇pgsB'C'A中，合成酶基因pgs A的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，

3.一种γ-PGA合成酶的基因簇pgsB'C'A的制备方法，其特征在于，将来源于地衣芽孢杆菌的γ-PGA合成酶基因簇pgsBCA中的pgsBC替换为来源于枯草芽孢杆菌或甲基营养型芽孢杆菌的γ-PGA合成酶基因簇pgsBCA中的pgsBC。...

【技术特征摘要】

1.一种γ-pga合成酶的基因簇pgsb'c'a，其特征在于，所述基因簇pgsb'c'a中，合成酶基因pgs b'、pgs c'的核苷酸序列包括如下任意一种：

2.根据权利要求1所述的γ-pga合成酶的基因簇pgsb'c'a，其特征在于，所述基因簇pgsb'c'a中，合成酶基因pgs a的核苷酸序列如seq id no.3所示，

3.一种γ-pga合成酶的基因簇pgsb'c'a的制备方法，其特征在于，将来源于地衣芽孢杆菌的γ-pga合成酶基因簇pgsbca中的pgsbc替换为来源于枯草芽孢杆菌或甲基营养型芽孢杆菌的γ-pga合成酶基因簇pgsbca中的pgsbc。

4.一种重组质粒，根据权利要求1或2任一所述的基因簇pgsb'c'a构建。

5.一种聚合酶基因重组菌株，根据权利要求4所述的重组质粒转化构建。

6.根据权利要求5所述的重组菌株，其特征在于，以c.glutamicum f343为底盘。

【专利技术属性】
技术研发人员：徐国强，刘婉婧，沈建成，王籍阅，张晓娟，张晓梅，钱建瑛，龚劲松，史劲松，许正宏，
申请(专利权)人：江苏集萃未来食品技术研究所有限公司，
类型：发明
国别省市：

全部详细技术资料下载 我是这个专利的主人