一种发根根瘤菌介导的油松不定根遗传转化方法技术

本发明专利技术提供了一种发根根瘤菌介导的油松不定根遗传转化方法，将带有RUBY报告基因的载体转化到发根根瘤菌中；当油松种子苗的茎长距根部超过3cm时，切掉根部，将伤口处浸没在发根根瘤菌重悬液中，并进行抽真空；将植株根部伤口处裹满发根根瘤菌菌体后，移栽至土培基质中培养30~45d，当愈伤组织分化为再生不定根时，观察再生不定根的颜色，判断是否为植物阳性转化不定根。本发明专利技术所述构建的体系突破了油松遗传转化困难的技术屏障，为油松重要基因的功能以及根茎之间信号转导等相关研究工作提供了技术操作手段，并且为后续油松乃至其他针叶树种的关键功能基因功能鉴定以及遗传修饰种质创制提供了技术支撑和指导。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于植物转基因，具体涉及一种发根根瘤菌介导的油松不定根遗传转化方法。

技术介绍

1、植物遗传转化是植物基因工程和先进分子育种的重要工具。然而，目前植物遗传转化通常通过两种方式之一进入植物细胞：其一是农杆菌介导遗传转化，其二是基因枪法。但这些转化方法除了需要依赖繁琐的组织培养操作过程外，还严重依赖于植物种类和基因型，转化效率低，不确定性大。此外，大多数植物物种不易进行遗传转化，这对基因工程技术的实际应用带来了巨大的挑战。

2、在全球范围内，针叶树是木材和纸浆材的重要来源，具有巨大的经济和生态价值。针叶树基因组庞大、杂合性高、营养生长期长、遗传转化体系有限，限制了研究其发育调控的研究的开展，导致研究进展缓慢。

3、油松（ pinus tabuliformis）是针叶树研究的代表性物种。油松是我国特有的乡土针叶树种，又称为“中国松（chinese pine）”，生态适生区达300万平方公里，是我国重要的生态与用材树种。同时，油松25gb超大基因组高质量组装与精确基因注释也已经完成，是世界上质量最高的针本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种发根根瘤菌介导的油松不定根遗传转化方法，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的发根根瘤菌介导的油松不定根遗传转化方法，其特征在于，步骤（1）具体包括如下步骤：

3.根据权利要求2所述的发根根瘤菌介导的油松不定根遗传转化方法，其特征在于，每升抗性TY培养基含有75~100mg壮观霉素、5g蛋白胨、3g酵母提取物和1M氯化钙。

4.根据权利要求2所述的发根根瘤菌介导的油松不定根遗传转化方法，其特征在于，所述发根根瘤菌为K599。

5.根据权利要求1所述的发根根瘤菌介导的油松不定根遗传转化方法，其特征在于，步骤（3）中，切根的位置为植物...

【技术特征摘要】

1.一种发根根瘤菌介导的油松不定根遗传转化方法，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的发根根瘤菌介导的油松不定根遗传转化方法，其特征在于，步骤（1）具体包括如下步骤：

3.根据权利要求2所述的发根根瘤菌介导的油松不定根遗传转化方法，其特征在于，每升抗性ty培养基含有75~100mg壮观霉素、5g蛋白胨、3g酵母提取物和1m氯化钙。

4.根据权利要求2所述的发根根瘤菌介导的油松不定根遗传转化方法，其特征在于，所述发根根瘤菌为k599。

5.根据权利要求1所述的发根根瘤菌介导的油松不定根遗传转化方法，其特征在于，步骤（3）中，切根的位置为植物的根茎结合处以上0.5~1cm处。

6.根据权利要求1所述的发根根瘤菌介导的油松不定根遗传转化方法，其特征在于，步骤（3）中，重悬液配方为10mm 2-吗啉乙磺酸、10mm 氯化镁...

【专利技术属性】
技术研发人员：钮世辉，李京京，孟冬，李晨赫，左权，宋依桐，高凯，刘佳凡，
申请(专利权)人：北京林业大学，
类型：发明
国别省市：