本发明专利技术涉及一种枯草芽孢杆菌及其在防治设施蔬菜连作障碍中的应用，枯草芽孢杆菌Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ是保藏号为ＣＧＭＣＣ Ｎｏ．２２７１的Ｍ－２菌株。Ｍ－２菌株是一种分离于海洋红树植物的根际促生菌，能够抑制黄瓜枯萎病病菌、番茄根腐病病菌、大豆根腐病病菌等多种有害真菌的生长，可有效的防治设施蔬菜连作障碍，增加设施蔬菜的品质和产量。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物技术和农业病害防治
，具体地说，它涉及一种枯草 芽孢杆菌及其在防治设施蔬菜连作障碍中的应用。
技术介绍
据联合国粮农组织调查资料显示，全球每年被病虫害夺去的农作物占收成的20% 30%,由此造成的经济损失达1200亿美元。目前主要是通过喷洒化学试 剂来防治。但是由于大量使用化学农药，造成了空气、水源、土壤和食物不同程 度的污染，甚至出现毒物逐渐积累在家畜和人类体内引起中毒的现象。全世界每 年约有200万人因化学农药而中毒，其中大约有4万人死亡。而且，长期使用某 些化学农药也会使害虫产生抗药性，椐公开的统计资料表明具有抗药性的害虫目 前已有417种。近年来，在农业生产中，应用生物农药取代化学农药已逐渐成为 一种趋势。世界各国针对化学农药的种种弊端，已研制出一系列选择性强、效率 高、成本低、无污染、对人畜无害的生物制剂。我国也将逐步用生物农药取代化 学农药，特别是在蔬菜的生产上将尽早使用生物农药。2008年我国设施蔬菜栽培面积超过了 200万公顷，现已成为世界设施园艺 面积最大的国家。设施蔬菜已成为我国农业生产中最有活力的新兴产业，为我国 菜篮子工程的建设起到了巨大作用。但设施蔬菜具有高度集约化、复种指数高和 种类单一的特点，多年连作，出现了土壤环境恶化、蔬菜病虫害严重、产量降低、 蔬菜品质变劣等一系列不良现象，严重威胁设施蔬菜生产的可持续发展，连作造 成的障碍已经成为蔬菜栽培生产中亟待解决的一大技术难题。引起作物包括设施蔬菜连作障碍的原因是复杂的，是作物一土壤两个系统内 部诸多因素综合作用结果的外在表现。不同作物产生连作障碍的原因可能是不同 的。1983年日本将产生连作障碍的原因归纳为五大因子(l)土壤养分亏缺；(2) 土壤反应异常(毒素)；(3)土壤物理性状恶化；(4)来自植物的有害物质；(5) 土壤微生物变化。同时强调在这五大因子中，土壤微生物区系的变化是连作障碍的主要因子，其它为辅助因子。近几年来国内外对根分泌物的研究成为揭示连 作障碍机制的热点。据公开的研究资料表明无论大棚或露地，土壤中微生物的种类均是繁多的。在各类群微生物中， 一般都以细菌数量为最多，其次是放线菌，真菌数量居第3 位；大棚中上述微生物数量及微生物活性均高于露地。真菌中以青霉菌、曲霉菌、 小克银汉霉菌为主，兼性寄生菌长孺孢菌、粉孢霉等病原真菌在大棚、露地土壤 中都有存在。因此，这些真菌引起的病害并不是设施温室、大棚土壤特有的障碍 因子。从种植年限看，细菌数量无明显变化，而种植年限长的大棚中真菌、放线 菌数量较种植年限短的大棚中少、这种状况的产生可能与大棚内较高的湿度及较 高含盐量对其抑制有关。公开的研究资料还表明土传病虫害是引起连作障碍因子中最主要的因子， 有关连作障碍原因的调査结果表明，引起蔬菜连作障碍的70%左右的地块是由 于土壤传染性病虫害所引起的。连作提供了根系病害赖以生存的寄主和繁殖的场 所，使得土壤中的病原菌数量不断增加，特别是近年来由于过多的使用化肥所带 来土壤中病原拮抗菌的减少，更加重了土传病虫害的发生。根际微生物种类繁多且活跃，其中能够促进植物生长、防治病害、增加作物 产量的微生物被称为促生菌(Plant Growth-Promoting Rhizobacteria,简称PGPR)。 它们和植物间是互生关系，与植物根系相互作用、相互促进。微生物大量聚集在 根系周围，将有机物转变为无机物，为植物提供有效的养料；同时，微生物还能 分泌维生素，生长刺激素等，促进植物生长。在植物生长过程中，死亡的根系和 根的脱落物(根毛、表皮细胞、根冠等)，以及根系向根外分泌的无机物和有机 物是微生物重要的营养来源和能量来源；由于根系的穿插，使根际的通气条件和 水分状况优于根际外，从而形成利于微生物的生态环境。PGPR可以抑制土壤中有害病原微生物的繁殖，并可以产生有益植物生长的 代谢产物，从而可以用来防治连作障碍，促进植物的生长发育、改善蔬菜的品质， 其研究和产业化前途光明、催人奋进，事实证明PGPR产业化是今后国内外农业 生物
发展的重要领域和方向。
技术实现思路
本专利技术的目的在于针对设施农业连作障碍日益严重的技术问题，而提供一种 枯草芽孢杆菌及其在防治设施蔬菜连作障碍中的应用。本专利技术涉及的枯草芽孢杆菌(Bacz7/M ra6fc) M-2菌株，于2007年11月 29日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏号为 CGMCC No.2271。所述枯草芽孢杆菌(5ad//s ;ywto'fc) M-2 CGMCC No.2271 ，是从海洋红树植物中分离得到，经培养基富集后通过抑菌圈试验筛选获得。所述枯草芽孢杆菌(Bflc/〃Mw6rifc) M-2 CGMCCNo.2271的细胞形态特 征革兰氏阳性菌，杆状，大小为0.5 l.(Himx3.5 6.(Vm，芽孢端生或次端生， 周生鞭毛，能运动。所述枯草芽孢杆菌(Sflc/〃www^7&) M-2 CGMCCNo.2271的生理生化特 征生长温度27。C 45。C， pH4 9,NaCL耐受性2%~6%，触酶试验、H2S试验、 淀粉水解试验、纤维素水解试验和MR试验均为阳性，苯丙氨酸脱氨试验、脲酶 试验、氧化酶试验、明胶液化试验、酪氨酸降解试验和V-P试验均为阴性，产酸 利用甘露醇，不能利用阿拉伯糖，半乳糖，木糖，鼠李糖，蔗糖，肌糖和柠檬酸 盐。所述枯草芽孢杆菌(5flc/〃w wto加)M-2 CGMCC No.2271的16S rRNA 的核苷酸具有如序列表所示序列。所述枯草芽孢杆菌M-2 CGMCC No.2271在防治设施蔬菜 连作障碍中的应用。所述枯草芽孢杆菌Bac///Wls做^/fc M-2 CGMCC No.2271菌株的应用方法是发酵培养一稀释一喷洒一效果测定。所述枯草芽孢杆菌5fl7/w M-2 CGMCC No.2271菌株的发酵培养基组成为g/L:葡萄糖IO，酵母膏IO，牛肉膏4，蛋白胨4， NaC125，pH7.2 7.4。本专利技术涉及的菌株，参照《Bergey，s Mannual of Systematic Bacteriology)) Vol. 聰的内容，根据其形态特征和生理生化特征，以及16SrRNA基因序列结果，经 多相分类鉴定是一种枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，命名为M-2。本专利技术提供的M-2CGMCC No.2271株菌，是一种优良的根际促生菌 (PGPR)，对设施蔬菜连作障碍中的真菌病害具有很强的抑制作用，可以抑制 多种致病真菌的生长，特别是防治黄瓜枯萎病、棉花枯萎病、立枯病和各种腐 霉和疫霉引起的植物病害。对于促进植物的生长，具有高效、无污染等突出优点。 附图说明附图1是枯草芽孢杆菌5ad/to swto'fc M-2 CGMCC No.2271菌株的显微 照片。附图2是枯草芽孢杆菌Bac/〃M wto'fo M-2 CGMCC No.2271菌株对连作土壤中真菌作用结果测定图。附图3是枯草芽孢杆菌5ac/〃M M-2 CGMCC No.2271菌株发酵液不同稀释倍数对幼苗生根生长促进效果比对照片。附图4是枯草芽孢杆菌Sad〃w M-2 CGM本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种枯草芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ），是保藏号为ＣＧＭＣＣ Ｎｏ．２２７１的Ｍ－２菌株。
【技术特征摘要】
1、一种枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，是保藏号为CGMCC No.2271的M-2菌株。2、 如权利要求1所述的枯草芽孢杆菌(^ d//Mw6ri/&) M-2菌株，是从海洋红树植物中分离得到，经ZoBell营养培养基富集后通过抑菌圈试验筛选获得。3、 如权利要求1所述的枯草芽孢杆菌5a7/附幼WtoM-2CGMCCNo.2271菌株，其特征在于革兰染色呈阳性，杆状，大小为0.5nm l.(Vmx3.5pm 6.(^m， 芽孢端生或次端生，周生鞭毛，能运动；生长温度27°C 45°C， pH4~9， NaCl 耐受性2%~6%;触酶试验、H2S试验、淀粉水解试验、纤维素水解试验和MR 试验均为阳性；苯丙氨酸脱氨试验、脲酶试验、氧化酶试验、明胶液化试验、...
【专利技术属性】
技术研发人员：孙勇民，范延辉，任超，王芃，傅明范，树生权，
申请(专利权)人：天津现代职业技术学院，天津市轻工业化学研究所，
类型：发明
国别省市：12[中国|天津]
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