敲除OsNAC95基因在正向调控水稻抗褐飞虱中的应用制造技术

本发明专利技术涉及生物基因工程技术领域，特别是涉及敲除OsNAC95基因在正向调控水稻抗褐飞虱中的应用。本发明专利技术实施例中通过CRISPR/Cas9基因编辑技术，对受体水稻中的OsNAC95基因进行编辑，获得OsNAC95基因编辑的转基因植株OsNAC95‑Cas。采用苗期集团法，对T<subgt;2</subgt;代纯合转基因植株进行了褐飞虱抗性鉴定。与转基因受体亲本B1415(对照组，以五山丝苗为轮回亲本的Bph14/Bph15聚合系，记作B1415，下同)相比，OsNAC95‑Cas更加抗虫，证实OsNAC95与水稻对褐飞虱的抗性相关，可用于创制水稻褐飞虱抗性新种质。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物基因工程，特别是涉及敲除osnac95基因在正向调控水稻抗褐飞虱中的应用。

技术介绍

1、褐飞虱(nilaparvata lugensbph)是影响我国水稻生产的主要虫害之一，它们是一种水稻专食性的害虫，通过产卵危害、吸食危害、传播水稻病害，导致受灾的水稻成片的倒伏枯死、减产甚至绝收，严重威胁着我国的粮食安全。使用农药防治，会增加生产成本、污染环境和稻谷，也使褐飞虱产生抗药性。

2、培育和种植含有抗褐飞虱基因的抗虫水稻品种是防治褐飞虱经济、有效、环境友好的实用途径。聚合利用抗褐飞虱基因bph14和bph15培育的抗虫水稻品种能有效提高水稻对褐飞虱的抗性，在此基础上，进一步发掘和利用抗性调控关键基因，持续提高水稻品种的抗虫性，是积极应对不断增强的褐飞虱致害性的必要手段。

3、nac(nam、ataf1/2、cuc2)转录因子家族是目前发现的植物基因组中最大的转录因子家族之一，其蛋白结构特点是n端含有高度保守的约150个氨基酸组成的nac结构域，参与dna的结合，c端是转录激活结构域，参与对靶基因的转录调节。nac转录本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.敲除OsNAC95基因在正向调控水稻抗褐飞虱中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述OsNAC95基因的CDS核苷酸序列如SEQID No.1所示。

3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述OsNAC95基因编码的蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。

4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述应用包括以下步骤：

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，扩增所述步骤1)靶点序列靶点的引物对为正向引物OsNAC95-F和反向引物OsNAC95-R；所述正向引物OsNAC95-F的核苷酸序列如SE...

【技术特征摘要】

1.敲除osnac95基因在正向调控水稻抗褐飞虱中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述osnac95基因的cds核苷酸序列如seqid no.1所示。

3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述osnac95基因编码的蛋白质的氨基酸序列如seq id no.2所示。

4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述应用包括以下步骤：

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，扩增所述步骤1)靶点序列靶点的引物对为正向引物osnac95-f和反向引物osnac95-r；所述正向引物osnac95-f的核苷酸序列如seqid no.5所示，所述反向引物osnac95-r...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡亮，杨大兵，王红波，杜雪树，李进波，万丙良，夏明元，戚华雄，牟同敏，吴艳，
申请(专利权)人：湖北省农业科学院粮食作物研究所，
类型：发明
国别省市：