黑色素合成基因及其在鞘茎点霉遗传操作中的应用制造技术

本发明专利技术涉及黑色素合成基因作为鞘茎点霉属真菌遗传操作中的应用。本发明专利技术在研究过程中，发现鞘茎点霉属真菌MEFC009中含有2个黑色素合成相关基因，其中的一个或两个失活，可导致菌落颜色由黑色变成白色，但是菌株的生长和FR901379的产量不受影响。回补后颜色恢复。将外源基因表达盒插入到这两个基因位点上也不影响菌株的生长和FR901379的产量，并且外源基因可正常表达。这使得可将这两个基因作为遗传操作平台，用于外源基因的表达，同时还实现了转化子的可视化筛选，大大提高了鞘茎点霉突变株的筛选效率，为鞘茎点霉属真菌的改造提供了新的路径。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物医药领域，更特别地，涉及色素合成基因作为鞘茎点霉属真菌遗传操作中的应用，以及一种获得表达外源基因的鞘茎点霉突变株的方法，还涉及一种提高鞘茎点霉属真菌基因编辑效率的方法。

技术介绍

1、棘白菌素类化合物是一类重要的抗真菌药物，通过非竞争性地抑制β-1,3-葡萄糖合成酶的活性来抑制真菌细胞壁的形成，最终导致真菌细胞裂解死亡。由于人类细胞不含有细胞壁，因此该类药对人体的毒性小，安全性高。目前，已上市的棘白菌素类药物包括卡泊芬净、米卡芬净、阿尼芬净等。据报道，鞘茎点霉属真菌(coleophoma sp.)mefc009可以合成米卡芬净的前体化合物fr901379，但是由于遗传改造效率低且方法有限，缺少特异性筛选标记和中性整合位点，对coleophoma sp.进行代谢工程改造受到阻碍，从而限制了米卡芬净的应用。

2、coleophoma sp.mefc009中的色素属于dhn型(1,8-二羟基萘)黑色素，它不是真菌生长发育所必需的物质，不会影响真菌的生长和代谢，且缺失黑色素可以通过菌落颜色变化快速筛选出阳性突变株，所以黑色素合成基因可本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.黑色素合成基因作为鞘茎点霉属(Coleophoma sp.)真菌遗传操作的插入位点的应用。

2.黑色素合成基因作为鞘茎点霉属真菌遗传操作筛选标记的应用。

3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述黑色素合成基因编码的氨基酸序列如SEQ ID NO：1或2所示。

4.一种获得表达外源基因的鞘茎点霉突变株的方法，其特征在于，包括将所述外源基因的表达盒插入出发菌株的黑色素合成基因所在位点的步骤。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述黑色素合成基因编码的氨基酸序列如SEQ ID NO：1或2所示。

<p>6.根据权利要求...

【技术特征摘要】

1.黑色素合成基因作为鞘茎点霉属(coleophoma sp.)真菌遗传操作的插入位点的应用。

2.黑色素合成基因作为鞘茎点霉属真菌遗传操作筛选标记的应用。

3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述黑色素合成基因编码的氨基酸序列如seq id no：1或2所示。

4.一种获得表达外源基因的鞘茎点霉突变株的方法，其特征在于，包括将所述外源基因的表达盒插入出发菌株的黑色素合成基因所在位点的步骤。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述黑色素合成基因编码的氨基酸序列如seq id no：1或2所示。

6.根据权利要求4或5所述的方法，其特征在于，所述出发菌株中所述黑色素合成基因为有功能基因，插入所述外源基因的表达盒...

【专利技术属性】
技术研发人员：吕雪峰，黄雪年，门萍，谢丽，周宇，李江，
申请(专利权)人：中国科学院青岛生物能源与过程研究所，
类型：发明
国别省市：