烟草及烟草制品中质体色素快速提取及测定方法技术

本发明专利技术涉及一种烟草及烟草制品中质体色素快速提取及测定方法，包括以下步骤：（１）采用超声萃取的方法快速提取烟草及烟草制品中的质体色素；（２）超声萃取后提取的质体色素采用高效液相色谱法测定其内各成分的含量。本发明专利技术采用高效液相色谱法对提取的质体色素进行快速测定，可以快速、准确地测出质体色素中的各成分的含量，大大提高了测定精度。采用本发明专利技术的提取和测定方法，大大提高了工作效率，同时还降低了成本，具有很好的社会价值和经济价值，易于推广应用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种烟草及烟草制品中质体色素的快速提取及测定方法，尤其 涉及一种通过超声萃取的方法快速提取烟草及烟草制品中的质体色素，并测定 烟草中质体色素的方法，属烟草化学测定方法领域。
技术介绍
烟草及烟草制品中质体色素的成分很多，主要包括叶绿素a、叶绿素b、 0 胡萝卜素、叶黄素、新黄质、紫黄质等，这些成分是影响烤烟香气品质和可用 性的主要成分。如果烟叶在调制、加工及陈化过程中色素降解完全和得当，会 使烟叶香气增加，色泽鲜亮，能够提高烟叶的品质和可用性。建立烟草样品中 质体色素的快速提取及测定方法，将有助于进一步研究确定色素含量与烟叶品 质的关系、确定科学合理的调制和陈化条件以及在提高巻烟叶组配方的精细化 程度等方面具有重要的意义和价值。质体色素中的叶绿素及类胡萝卜素类色素 稳定性差，提取测定时均要求低温、避光、快速。而现有的质体色素的提取常 用震荡浸提法等，震荡浸提法提取需要时间较长，易造成质体色素中的叶绿素 及类胡萝卜素类色素氧化分解；测定常采用分光光度法、高效薄层色谱扫描法 以及液相色谱法，分光光度法测定时准确性较差，高效薄层色谱扫描法及传统 的液相色谱法样品前处理复杂，效率低，釆用固相萃取法虽可简化样品前处理， 但使用成本较高。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种烟草及烟草制品中质体色素快速提取及测定方 法，以实现快速、准确、成本低。为了实现上述目的，本专利技术的技术方案采用了一种烟草及烟草制品中质体3色素快速提取及测定方法，包括以下步骤(2)采用超声萃取的方法快速提取烟草及烟草制品中的质体色素； (2)超声萃取后提取的质体色素采用高效液相色谱法测定其内各成分的含量。所述的步骤(1)的超声萃取方法具体步骤为准确称取样品，用卯％丙酮,内含0.1%的抗氧剂，在室温下超声萃取15—25 min，过滤；滤渣再用90%丙 酮，内含0.1%的抗氧剂，洗涤2 3次，至滤渣为白色，合并滤液，定容；取 萃取液，过滤，滤液即为快速提取的质体色素溶液。 所述的抗氧剂为二丁基羟基甲苯。步骤(2)的高效液相色谱法采用的色谱柱为反相C18液相色谱柱，十八垸 基硅烷键合硅胶填充剂。步骤(2)中高效液相色谱法的流动相由A与B组成；其中A由浓度为80% 的乙腈与异丙醇组成，B为超纯水。液动相A中浓度为80M的乙腈与异丙醇的体积比为1: 1。步骤(2)中采用线性梯度洗脱；流速0.5ml/min，进样量为10uL，柱温 为40。C，检测波长为450nm。本专利技术釆用超声萃取方法进行快速提取烟草及烟草制品中的质体色素，大 大縮短了质体色素测定的前处理时间，提取仅需要30分钟左右，而现有技术提 取质体色素往往需要4一5个小时，本专利技术的提取方法大大縮短了提取时间，提 高了工作效率。本专利技术采用高效液相色谱法对提取的质体色素进行快速测定， 可以快速、准确地测出质体色素中的各成分的含量，大大提高了测定精度。采 用本专利技术的提取和测定方法，大大提高了工作效率，同时还降低了成本，具有 很好的社会价值和经济价值，易于推广应用。本专利技术的方法简化了样品的前处理步骤，采用超声萃取方法快速提取质体 色素，利用髙效液相色谱法测定了烟草及烟草制品中的质体色素，取得较满意 的结果，其操作简单易控，测定结果精度较高，为进一步研究烟草及烟草制品4中质体色素与烟草品质关系提供了切实可行的技术路线。 附图说明图1为本专利技术中质体色素的高效液相色谱图。具体实施方式 实施例l按照样品取样标准抽取烤后烟叶样品500g，在4(TC的温度下烘干4h，粉 碎，过40目筛子，样品制备结束;准确称取制备后样品5.0000 g(精确至0.0001g)， 倒入100ml三角瓶，用40ml 90%的丙酮(内含0.1 %二丁基羟基甲苯BHT) 倒入三角瓶中，室温下超声萃取20 min，过滤，滤渣再用10 ml 90%的丙酮(内 含0.1%二丁基羟基甲苯BHT)洗涤2—3次，合并滤液，定容至100 ml，取2mL 萃取液，用0.45um微孔滤膜过滤，滤液进行HPLC分析，外标法定量；其中， 色谱柱为SymmetryC18反相色谱柱(3.9mm i.d. X150mm， 4u m)(美国Waters 公司)；流动相为A， 80%乙腈异丙醇=1: 1， B、超纯水；流速0.5ml/min, 在线梯度淋洗(如表l);检测波长450nm，进样量10ul，柱温20'C。图1中，9.14 min的峰图为新黄质，11.3 min的峰图为紫黄质，17.5 min 的峰图为叶黄素，25.97 min的峰图为叶绿素b, 28.47 mhi的峰图为叶绿素a， 35.19 min的峰图为0 -胡萝卜素。表l流动相的梯度条件时间(min)A%B%01000400100实施例2按照样品取样标准抽取巻烟成品样品500g，在40'C的温度下烘干4h，粉 碎,过40目筛子，样品制备结束;准确称取制备后样品5.0000 g(精确至0.0001g), 倒入100ml三角瓶，用40ml 90%的丙酮(内含0.1 %二丁基羟基甲苯BHT)倒入三角瓶中，室温下超声萃取20 min，过滤，滤渣再用10 ml卯％的丙酮(内 含0.1%二丁基羟基甲苯BHT)洗涤2 3次，合并滤液，定容至100 ml，取2mL 萃取液'，用0.45um微孔滤膜过滤，滤液进行HPLC分析，外标法定量；色谱 柱为SymmetryC18反相色谱柱(3.9mm i.d. X 150mm， 4 u m)(美国Waters公 司)；流动相为A、 80%乙腈异丙醇=1: 1， B、超纯水；流速0.5ml/min， 梯度淋洗；检测波长450nm，进样量10 ul，柱温20°C 。 实施例3取田间新鲜烟叶3000 g，在-45'C的温度下冻干，粉碎，过40目筛子，样 品制备结束；准确称取制备后样品1.0000 g (精确至O.OOOlg)，倒入100ml三 角瓶，用40ml 90。/o的丙酮(内含0.lX二丁基羟基甲苯BHT)倒入三角瓶中， 室温下超声萃取20min，过滤，滤渣再用10ml卯％的丙酮(内含0.1 %二丁 基羟基甲苯BHT)洗涤2 3次，合并滤液，定容至100ml，取2mL萃取液， 用0.45 ix m微孔滤膜过滤，滤液进行HPLC分析，外标法定量；色谱柱为 SymmetryC18反相色谱柱(3.9mm i.d. X150mm， 4nm)(美国Waters公司)； 流动相为A、 80%乙腈异丙醇=1: 1， B、超纯水；流速为0.5ml/min,梯 度淋洗；检测波长为450nm，进样量为10nl，柱温为20。C。最后所应说明的是以上实施例仅用以说明，而非限制本专利技术的技术方案， 尽管参照上述实施例对本专利技术进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理 解依然可以对本专利技术进行修改或者等同替换，而不脱离本专利技术的精神和范围 的任何修改或局部替换，其均应涵盖在本专利技术的权利要求范围当中。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种烟草及烟草制品中质体色素快速提取及测定方法，其特征在于：包括以下步骤：　（１）采用超声萃取的方法快速提取烟草及烟草制品中的质体色素；　（２）超声萃取后提取的质体色素采用高效液相色谱法测定其内各成分的含量。

【技术特征摘要】
1、一种烟草及烟草制品中质体色素快速提取及测定方法，其特征在于包括以下步骤(1)采用超声萃取的方法快速提取烟草及烟草制品中的质体色素；(2)超声萃取后提取的质体色素采用高效液相色谱法测定其内各成分的含量。2、 根据权利要求1所述的烟草及烟草制品中质体色素快速提取及测定方法， 其特征在于所述的步骤(1)的超声萃取方法具体步骤为准确称取样品，用 卯％丙酮，内含0.1%的抗氧剂，在室温下超声萃取15—25 min，过滤；滤渣再 用卯％丙酮，内含0.1%的抗氧剂，洗涤2 3次，至滤渣为白色，合并滤液， 定容；取萃取液，过滤，滤液即为快速提取的质体色素溶液。3 、根据权利要求2所述的烟草及烟草制品中质体色素快速提取及测定方法， 其特征在于所述的抗氧剂为二丁基羟基甲苯。4、 根据权利要求1...

【专利技术属性】
技术研发人员：李世勇，韦凤杰，田海英，张东豫，张弘韬，刘蕙芳，
申请(专利权)人：河南中烟工业公司，
类型：发明
国别省市：41[中国|河南]