用于建立许氏平鲉卵原干细胞系的完全培养基及其应用制造技术

本发明专利技术涉及用于建立许氏平鲉卵原干细胞系的完全培养基及其应用，属于生物技术领域。所述完全培养基的成分及最终浓度为体积比20％FBS、4％青霉素‑链霉素‑庆大霉素、体积比1％许氏平鲉血清、体积比1％许氏平鲉仔鱼提取物、2ng/ml重组人白血病抑制因子、2ng/ml重组人碱性成纤维细胞生长因子、5mol/LHEPES缓冲液、β‑巯基乙醇50μmol/L及剩余体积的L‑15基础培养基。本发明专利技术方法获得的细胞经多次传代可保持旺盛活力和均一的形态，为生殖干细胞移植、卵原干细胞基因编辑、卵胎生鱼类机制等相关的研究提供了优质可靠的实验材料。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种用于建立许氏平鲉卵原干细胞系的完全培养基及其应用，属于生物技术/细胞分离培养。

技术介绍

1、许氏平鲉(sebastesschlegelii)，又称黑鲉、黑平鲉、黑鱼、刺毛、黑老婆，其肉质鲜美、营养价值丰富，故有“北方石斑鱼”之称。许氏平鲉是一种卵胎生鱼类，卵巢微环境对保证卵胎生硬骨鱼类的繁殖成功起着至关重要的作用。然而，精子和卵巢微环境之间相互作用的分子机制仍然不清楚。

2、细胞培养技术也叫细胞克隆技术，是指在模拟细胞体内生长环境的条件下，将细胞培养在无菌、一定营养条件、适宜的温度及酸碱度下，使其生长、繁殖，并维持结构和功能的一种技术，是细胞生物学研究中的重要技术，在生物学领域中占有重要地位。生殖干细胞是生殖细胞发育的早期阶段，是一类特殊类型的成体干细胞，它不但具有干细胞的特性，还具有传递遗传信息的能力。在鱼类中，生殖干细胞培养分为精原干细胞培养和卵原干细胞培养。

3、目前，多种鱼类中已建立起精原干细胞(spermatogonial stem cells，sscs)的长期培养体系和移植体系，包括斑马鱼、虹鳟、青鳉本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种用于建立许氏平鲉卵原干细胞系的完全培养基，其特征在于，所述完全培养基的成分及最终浓度为体积比20％FBS、4％青霉素-链霉素-庆大霉素、体积比1％许氏平鲉血清、体积比1％许氏平鲉仔鱼提取物、2ng/ml重组人白血病抑制因子、2ng/ml重组人碱性成纤维细胞生长因子、5mol/L HEPES缓冲液、β-巯基乙醇50μmol/L及剩余体积的L-15基础培养基。

2.根据权利要求1所述的一种用于建立许氏平鲉卵原干细胞系的完全培养基，其特征在于，所述体积比1％许氏平鲉血清：将许氏平鲉血液置于4℃、2ml离心管内静置2-3h，4℃下8000rpm离心15min，吸取分层的血清用...

【技术特征摘要】

1.一种用于建立许氏平鲉卵原干细胞系的完全培养基，其特征在于，所述完全培养基的成分及最终浓度为体积比20％fbs、4％青霉素-链霉素-庆大霉素、体积比1％许氏平鲉血清、体积比1％许氏平鲉仔鱼提取物、2ng/ml重组人白血病抑制因子、2ng/ml重组人碱性成纤维细胞生长因子、5mol/l hepes缓冲液、β-巯基乙醇50μmol/l及剩余体积的l-15基础培养基。

2.根据权利要求1所述的一种用于建立许氏平鲉卵原干细胞系的完全培养基，其特征在于，所述体积比1％许氏平鲉血清：将许氏平鲉血液置于4℃、2ml离心管内静置2-3h，4℃下8000rpm离心15min，吸取分层的血清用0.22μm滤膜过滤除菌后分装，保存在-20℃备用。

3.根据权利要求1所述的一种用于建立许氏平鲉卵原干细胞系的完全培养基，其特征在于，所述体积比1％许氏平鲉仔鱼提取物：收集初孵许氏平鲉仔鱼，无菌条件下研磨，并使用l-15做溶剂将研磨液的蛋白浓度调节至20mg/ml，用0.22μm滤膜过滤除菌后分装，保存在-20℃备用。

4.权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：邵长伟，张静静，王倩，刘宇岩，董才超，黄海军，杨宇，
申请(专利权)人：中国水产科学研究院黄海水产研究所，
类型：发明
国别省市：