【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本公开涉及用于对来源于ipsc(ink)或来源于脐带血(cb-nk)的自然杀伤(nk)细胞进行无饲养细胞扩增以产生治疗性nk细胞制剂的方法。
技术介绍
1、自然杀伤(nk)细胞是在先天免疫应答中起关键作用的细胞毒性淋巴细胞。nk细胞在表型上被表征为cd56+cd3-并且具有自发裂解肿瘤细胞和受病毒感染的细胞的能力。nk细胞还通过称为抗体依赖性细胞毒性的过程参与适应性免疫应答，其中nk细胞直接结合至被抗体分子结合的细胞并杀死这些细胞。在人体内，nk细胞在各种免疫器官如骨髓、淋巴结、脾脏、扁桃体和胸腺中分化并成熟。
2、人诱导的多能干细胞(ipsc)是一类多能干细胞，其通过特定基因的强制表达由非多能细胞人工生成。ipsc可用于生成用于治疗各种类型的癌症以及急性和慢性病毒感染的潜在无限来源的治疗上可行的nk细胞。因此，必须能够以可控的方式从ipsc有效且可重复地生成nk细胞。
3、已经记录了nk细胞以饲养细胞依赖性方式从ipsc开始分化的过程。从ipsc/cd34+衍生的未成熟nk细胞中离体扩增nk细胞的现有方案依赖于与人工生成的饲养细胞系如k562致瘤细胞系的共培养。饲养细胞系统中的扩增将未知的遗传/安全变异引入扩增的nk细胞群中，这可能会对后续在过继细胞免疫疗法中使用扩增的细胞群产生负面影响。因此，需要不包括与k562细胞或其他饲养细胞系共培养的nk细胞离体扩增的稳健方法。
4、本专利技术旨在克服目前自然杀伤细胞扩增中的缺陷。
技术实现思路
1、本
2、本公开的另一方面涉及一种根据本文公开的方法产生的nk细胞的治疗制剂。
3、本公开的另一方面涉及一种药物组合物，该药物组合物包含根据本文公开的方法产生的nk细胞的扩增制剂和药学上可接受的载体。
4、本公开的另一方面涉及一种治疗需要过继nk细胞疗法的受试者的方法。该方法包括向需要过继nk细胞疗法的受试者施用有效治疗需要过继nk细胞疗法的受试者的量的根据本文公开的方法产生的nk细胞的治疗制剂或包含其的药物组合物。
5、本文公开了用于从来源于源自ipsc或脐带血的cd34+祖细胞的未成熟nk细胞的异质制剂中扩增nk细胞的方法。这些方法与现有技术方法不同，现有技术方法需要将nk细胞与饲养细胞群(例如基因修饰的饲养细胞系(k562)或通过感染eb病毒而自然永生化的b细胞系)一起共培养。本文所述的无饲养细胞的培养方法产生晚期未成熟nk细胞和成熟nk细胞的异质扩增群体，考虑到异质扩增群体在体内移植时的持久性和扩增能力，所述异质扩增群体对于过继细胞疗法是有利的。相比之下，在饲养细胞培养物中扩增的nk细胞包含更同质的成熟nk细胞群，该细胞群具有有限的扩增和/或在患者治疗后迅速耗竭。因为本公开的扩增的nk细胞制剂是在不存在致瘤性饲养细胞的情况下产生的，所以不存在饲养细胞污染的风险，因此不需要在治疗性移植扩增的nk细胞制剂之前采用严格的纯化过程。根据本文所述的无饲养细胞的方法产生的扩增的nk细胞制剂可用作“现成的”治疗性nk细胞组合物，其适用于以多剂量施用于跨越不同遗传背景和免疫原性屏障的个体。
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1.一种产生自然杀伤(NK)细胞的治疗制剂的方法，所述方法包括：
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述培养不包括在细胞的饲养细胞群的存在下培养NK细胞的所述起始制剂。
3.根据权利要求1所述的方法，其中所述NKp30调节剂是NKp30抗体。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述处理还包括：
5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述NKp30调节剂、所述2B4配体和/或所述DNAM-1配体与固体载体偶联。
6.根据权利要求5所述的方法，其中所述固体载体是多个珠粒。
7.根据权利要求4至6中任一项所述的方法，其中所述2B4配体是CD48蛋白或其多肽片段。
8.根据权利要求4至6中任一项所述的方法，其中所述2B4配体是2B4抗体或其抗体结合片段。
9.根据权利要求4至6中任一项所述的方法，其中所述DNAM-1配体是CD155蛋白或其多肽片段。
10.根据权利要求4至6中任一项所述的方法，其中所述DNAM-1配体是CD112蛋白或其多肽片段。
12.根据权利要求11所述的方法，其中所述组合包含NKp30抗体、CD48蛋白或多肽、以及CD155蛋白或多肽。
13.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，其中在所述培养期间周期性地重复所述处理。
14.根据权利要求1至13中任一项所述的方法，其中所述处理和所述培养有效产生包含比所述起始制剂中NK细胞数目多至少20倍的NK细胞的扩增的NK细胞制剂。
15.根据权利要求1至13中任一项所述的方法，其中所述处理和所述培养有效产生包含比所述起始制剂中NK细胞数目多至少40倍的NK细胞的扩增的NK细胞制剂。
16.根据权利要求1至13中任一项所述的方法，其中所述处理和所述培养有效产生包含比所述起始制剂中NK细胞数目多40倍的NK细胞的扩增的NK细胞制剂。
17.根据权利要求1至16中任一项所述的方法，其中所述扩增的NK细胞制剂是人扩增的NK细胞制剂。
18.根据权利要求1至17中任一项所述的方法，其中所述扩增的NK细胞制剂包含晚期未成熟NK细胞和成熟NK细胞的异质混合物。
19.根据权利要求1至17中任一项所述的方法，其中所述扩增的NK细胞制剂包含CD56+/CD3-/CD45+/CD16+/-NK细胞。
20.根据权利要求1至19中任一项所述的方法，其中所述扩增的NK细胞制剂包含表达NKG2-C II型整合膜蛋白但不表达NKG2-A/NKG2-B II型整合膜蛋白的细胞。
21.根据权利要求1至20中任一项所述的方法，其中NK细胞的所述起始制剂的细胞被基因修饰，从而产生包含经基因修饰的NK细胞的扩增的NK细胞制剂。
22.根据权利要求21所述的方法，其中所述经基因修饰的NK细胞表达嵌合抗原受体(CAR)。
23.根据权利要求1所述的方法，其中所述起始制剂的所述NK细胞是CD56+/-/CD16-/CD45+/CD34-iNK细胞。
24.根据权利要求23所述的方法，其中所述NK细胞的所述起始制剂来源于CD34+诱导的多能干细胞(iPSC)或CD34+脐带血细胞。
25.根据权利要求1至24中任一项所述的方法，其中所述方法还包括：
26.根据权利要求25所述的方法，其中所述一种或多种刺激性细胞因子选自IL-2、IL-12、IL-15、IL18和IL21。
27.根据权利要求1所述的方法，所述方法还包括：
28.根据权利要求1至27中任一项所述的方法，其中所述扩增的NK细胞制剂包含约2×109个至约1×1011个NK细胞。
29.一种NK细胞的治疗制剂，根据权利要求1至28中任一项所述的方法产生。
30.一种药物组合物，所述药物组合物包含：
31.一种治疗需要过继NK细胞疗法的受试者的方法，所述方法包括：
32.根据权利要求31所述的方法，其中所述受试者患有癌症并且所述施用导致癌细胞死亡。
33.根据权利要求31所述的方法，其中所述受试者患有病毒感染并且所述施用导致受病毒感染的细胞死亡。
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种产生自然杀伤(nk)细胞的治疗制剂的方法，所述方法包括：
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述培养不包括在细胞的饲养细胞群的存在下培养nk细胞的所述起始制剂。
3.根据权利要求1所述的方法，其中所述nkp30调节剂是nkp30抗体。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述处理还包括：
5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述nkp30调节剂、所述2b4配体和/或所述dnam-1配体与固体载体偶联。
6.根据权利要求5所述的方法，其中所述固体载体是多个珠粒。
7.根据权利要求4至6中任一项所述的方法，其中所述2b4配体是cd48蛋白或其多肽片段。
8.根据权利要求4至6中任一项所述的方法，其中所述2b4配体是2b4抗体或其抗体结合片段。
9.根据权利要求4至6中任一项所述的方法，其中所述dnam-1配体是cd155蛋白或其多肽片段。
10.根据权利要求4至6中任一项所述的方法，其中所述dnam-1配体是cd112蛋白或其多肽片段。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的方法，其中所述处理包括：
12.根据权利要求11所述的方法，其中所述组合包含nkp30抗体、cd48蛋白或多肽、以及cd155蛋白或多肽。
13.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，其中在所述培养期间周期性地重复所述处理。
14.根据权利要求1至13中任一项所述的方法，其中所述处理和所述培养有效产生包含比所述起始制剂中nk细胞数目多至少20倍的nk细胞的扩增的nk细胞制剂。
15.根据权利要求1至13中任一项所述的方法，其中所述处理和所述培养有效产生包含比所述起始制剂中nk细胞数目多至少40倍的nk细胞的扩增的nk细胞制剂。
16.根据权利要求1至13中任一项所述的方法，其中所述处理和所述培养有效产生包含比所述起始制剂中nk细胞数目多40倍的nk细胞的扩增的nk细胞制剂。
17.根据权利要求1至16中任一项所述的方法，其中所述扩增的nk细胞制剂是人扩增的...
【专利技术属性】
技术研发人员：A·W·斯诺登，A·扎马尼，
申请(专利权)人：詹森生物科技公司，
类型：发明
国别省市：
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