【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及在基底上展示生物分子的方法，例如在流动池的表面上。本专利技术涉及用于在基底上展示异种核酸(xna)分子、rna分子和/或多肽的上游、下游或直接方法。本专利技术还涉及展示通过本专利技术的方法获得或可获得的生物分子的基底。
技术介绍
1、能够高通量分析生物分子(例如，分析结合亲和力或其他特性)的平台对于药物发现至关重要。流动池(flow cell)通常用作展示dna分子的基底，然后可以对dna分子进行查询以获得位置和序列信息。
2、已经尝试利用展示rna分子或多肽的流动池。例如，一些方法利用固定至流动池的dna簇产生rna，该rna通过停滞的rna聚合酶非共价连接至dna簇。然后，可以翻译rna。此类方法包括wo 2014/189768、layton等人(layton等人,2019,molecular cell 73,1075-1082)和us2019/0112730中公开的方法。然而，这些方法存在已知的缺点。例如，这些复合物未共价连接至流动池，会随着时间的推移而分解，需要使用信号丢失归一化技术进行测定。此外，任何...
【技术保护点】
1.一种在基底上展示非DNA核酸分子的方法，包含：
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述第二核酸是RNA分子。
3.根据权利要求2所述的方法，其中所述核酸聚合酶包含与SEQ ID NO：1的氨基酸序列具有至少36％同一性的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列包含相对于SEQ ID NO：1的氨基酸序列的Y409和E664突变。
4.根据权利要求3所述的方法，其中所述Y409突变是Y409N或Y409G，所述E664突变是E664K或E664Q。
5.根据权利要求3所述的方法，其中所述Y409突变是Y409G，所述E664突变
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种在基底上展示非dna核酸分子的方法，包含：
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述第二核酸是rna分子。
3.根据权利要求2所述的方法，其中所述核酸聚合酶包含与seq id no：1的氨基酸序列具有至少36％同一性的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列包含相对于seq id no：1的氨基酸序列的y409和e664突变。
4.根据权利要求3所述的方法，其中所述y409突变是y409n或y409g，所述e664突变是e664k或e664q。
5.根据权利要求3所述的方法，其中所述y409突变是y409g，所述e664突变是e664k。
6.根据权利要求3所述的方法，其中所述核酸聚合酶的氨基酸序列包含seq id no：3。
7.根据权利要求1所述的方法，其中所述第二核酸是xna分子。
8.根据权利要求7所述的方法，其中所述xna分子包含阿拉伯糖核苷酸、阿拉伯糖核酸(ana)核苷酸、2’-氟代阿拉伯糖核酸(fana)核苷酸、2’-o-甲基核糖核酸(2’ome)核苷酸、2’-o-甲氧基乙基(moe)核酸核苷酸、硫代磷酸酯2’-o-甲氧基乙基(ps-moe)核苷酸、磷酸二酰胺吗啉代核苷酸、锁核酸(lna)核苷酸、p-烷基膦酸酯核酸(phna)核苷酸、苏糖核酸(tna)核苷酸、己糖醇核酸(hna)核苷酸、2’羟基己糖醇(atna)核苷酸、环己烯核酸(cena)核苷酸或3’脱氧dna(2’-5’)核苷酸。
9.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述核酸聚合酶包含与seq id no：1的氨基酸序列具有至少36％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、99％或100％相似性或同一性的氨基酸序列，并且还包含允许至少一种类型的xna核苷酸或rna核苷酸聚合的突变。
10.根据权利要求9所述的方法，其中所述核酸聚合酶的氨基酸序列包含一个或多个或全部以下突变：v93q、d141a、e143a和a485l。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的方法，其中所述聚合酶是tgk、tgllk、2m、bst、rt521、6g12、6g12521、c7、pglvv、pglvvwa、d4k或其变体。
12.根据权利要求1至11中任一项所述的方法，其中在步骤ii)a)之后，所述方法包含切割所述第一核酸并使所述桥线性化。
13.根据权利要求12所述的方法，还包含在适于聚合的条件下将线性化产物与所述核酸聚合酶重新接触。
14.一种在基底上展示非dna核酸分子的方法，包含：
15.根据权利要求14所述的方法，其中所述第二核酸是rna分子。
16.根据权利要求12至15中任一项所述的方法，其中所述桥因温度而变性。
17.根据权利要求12至16中任一项所述的方法，其中用甲酰胺基嘧啶dna糖苷酶(fpg)在8-氧代鸟嘌呤位点处切割所述第一核酸。
18.根据权利要求17所述的方法，其中在用fpg切割之前，第三核酸在8-氧代鸟嘌呤位点处与所述第一核酸退火。
19.根据权利要求1至18中任一项所述的方法，其中步骤ii)a)包含至少5、10、12、15、20或25个循环的桥接聚合。
20.根据权利要求1至19中任一项所述的方法，其中在步骤iii)中通过将所述第一核酸与变性试剂接触来去除所述第一核酸。
21.根据权利要求20所述的方法，其中所述变性试剂是缓冲液，包含：
22.根据权利要求1至21中任一项所述的方法，其中所述第二核酸是rna分子且编码多肽，并且还包含：
23.根据权利要求22所述的方法，其中步骤iv)的条件包含三甲胺n-氧化物(tmao)。
24.根据权利要求22或权利要求23所述的方法，其中所述编码的多肽是抗体片段或酶。
25.根据权利要求2...
【专利技术属性】
技术研发人员：B·波雷布斯基，P·霍利格，
申请(专利权)人：英国研究与创新组织，
类型：发明
国别省市：
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