稻秆碳源培养彩绒革盖菌诱导草酸脱羧酶的方法技术

本发明专利技术涉及一种稻秆碳源培养彩绒革盖菌诱导草酸脱羧酶的方法，包括：（１）将粉碎的稻秆用酸溶液浸泡，在１００－１５０℃条件下水解；（２）配制发酵培养基，调节ｐＨ值为４．０－５．０；（３）取菌丝体接入液体种子培养基，待形成白色菌丝群但尚未浮出水面时，将菌丝体和培养基全部转移到含有无菌玻璃珠的容器中，震荡破碎，以３－１５％的接种量接入发酵培养基；（４）培养４－６天，加入草酸，培养０．５－６天后获取菌丝体；菌丝体经液氮冷冻后研磨破碎，用醋酸缓冲液提取菌丝碎片，离心。本发明专利技术方法简单，易于操作，成本低，且碳源的制备可控性强，含糖量稳定。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种稻秆碳源培养彩绒革盖菌诱导草酸脱羧酶的方法，包括：　　（１）将粉碎的稻秆按照固液比为１ｇ∶５－１５ｍｌ用酸溶液浸泡１０－２０ｈ，在１００－１５０℃条件下水解反应２０－６０ｍｉｎ，离心去除残渣后，得到稻秆水解液，并用ＤＮＳ法测定水解液中还原糖含量；　　（２）按７－３０ｇ／Ｌ的还原糖量，将稻秆水解液配制发酵培养基，调节ｐＨ值为４．０－５．０，过滤除去杂质，并添加氮源和无机盐获得发酵培养基，再检查并调节ｐＨ值至４．０－５．０，灭菌后备用；　　（３）取２－３片直径为９～１１ｍｍ含菌丝体的琼脂培养基，接入液体种子培养基，在３０℃静置培养４－６天；待菌丝体在液体培养基上方形成白色菌丝群但尚未浮出水面时，将菌丝体和培养基全部转移到含有无菌玻璃珠的容器中，对菌丝体进行震荡破碎获得含有菌丝碎片的悬浊液，以３－１５％的接种量接入发酵培养基，在２０－３０℃和１００－２５０ｒｐｍ转速条件下培养４－６天；　　（４）待菌丝球形成时，加入终浓度为５－２０ｍＭ的草酸诱导草酸脱羧酶的产生，培养０．５－６天后获取菌丝体；菌丝体经液氮冷冻后研磨破碎，用０．２Ｍ，ｐＨ　３．７的醋酸缓冲液提取菌丝碎片，离心去除残渣，所得上清液即为草酸脱羧酶粗酶液。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：洪枫，杨雪霞，杨光，曹张军，
申请(专利权)人：东华大学，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]