梅花PDS基因VIGS沉默体系及其构建方法与应用技术

技术编号:41826007 阅读:169 留言:0更新日期:2024-06-24 20:38
本发明专利技术提供一种梅花PDS基因VIGS沉默体系及其构建方法与应用,为一种基于VIGS技术的梅花‘淡丰后’基因瞬时沉默体系的构建方法,并对所构建的沉默体系进行了应用验证,结果显示该沉默体系可显著降低梅花叶片中PmdPDS的表达量,植株沉默率达84%。本发明专利技术的基因沉默体系简便、快速、高效,为梅花遗传改良和分子育种相关的研究提供有力支持。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物,具体地说,涉及一种梅花pds基因vigs沉默体系及其构建方法与应用。


技术介绍

1、梅花(prunus mume)以川、滇、藏为起源中心,是我国十大名花之一,应用历史悠久,种质资源丰富。‘淡丰后’属于杏梅系梅花,是以杏和梅为亲本杂交而成的梅花品种。该品种枝叶似杏,花期比真梅系晚,抗寒性强。近年来为提高育种效率,利用现代分子生物技术挖掘到许多梅花重要性状关键基因,但由于梅花转基因体系不成熟且周期长,基因功能验证大多依赖于拟南芥和烟草等模式植物的异源表达系统。病毒诱导的基因沉默技术(virus-induced gene silencing,vigs)是能够快速鉴定基因功能的方法之一。vigs是一种rna介导的防御机制,利用病毒载体携带植物目的基因片段,侵染植物后使重组病毒在植物中复制产生双链rna,利用植物自身抵抗侵染病毒的防御机制来沉默基因,并可根据表型变异来进行基因功能分析,实现基因功能的快速鉴定。烟草脆裂病毒(tobacco rattlevirus,trv)是植物中被广泛应用的病毒载体,具有基因组小,便于改造,不产生典型病毒性状等优点本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种沉默梅花PDS基因的特异性核苷酸片段,其特征在于,序列如SEQ ID NO:2所示。

2.梅花PDS基因VIGS沉默体系的构建方法,其特征在于,包括以下步骤:

3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,步骤3)中所述引物对的序列如SEQ ID NO:3-4所示。

4.按照权利要求2或3所述方法构建得到的沉默体系。

5.权利要求4所述沉默体系在鉴定梅花PDS基因功能中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用,其特征在于,所述应用包括:将含有pTRV1载体的农杆菌侵染液和含有重组载体pTRV2-PmdPDS的农杆菌侵染液按等体...

【技术特征摘要】

1.一种沉默梅花pds基因的特异性核苷酸片段,其特征在于,序列如seq id no:2所示。

2.梅花pds基因vigs沉默体系的构建方法,其特征在于,包括以下步骤:

3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,步骤3)中所述引物对的序列如seq id no:3-4所示。

4.按照权利要求2或3所述方法构建得到的沉默体系。

5.权利要求4所述沉默体系在鉴定梅花pds基因功能中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用,其特征在于,所述应用包括:将含有ptrv1载体的农杆菌侵染液和含有重组载体ptrv2-pmdpds的农杆菌侵染液按等体积比混合,对梅花幼苗的叶片进行侵染;侵染后继续培养梅花幼苗,观察叶片表型变化。

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【专利技术属性】
技术研发人员:孙丽丹苗润田蒙娟李子葳吴昊张启翔程堂仁
申请(专利权)人:北京林业大学
类型:发明
国别省市:

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