滚环扩增方法、测序文库制备方法及制得的DNA纳米球技术

提供了一种滚环扩增方法、测序文库制备方法及制得的DNA纳米球，该滚环扩增方法，包括：将双链DNA和介导序列在同一体系中依次进行变性和退火，使介导序列与变性的单链DNA两端互补配对；在体系中同时引入连接酶和聚合酶，在连接酶作用下使所述单链DNA两端连接，同时在聚合酶作用下以介导序列为引物、以单链DNA为模板进行滚环扩增反应，得到DNA纳米球。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及测序，具体涉及一种制备dna纳米球的滚环扩增方法、测序文库制备方法及制得的dna纳米球。

技术介绍

1、滚环扩增(rca)是以单链环状dna/rna为模版，将dna/rna进行大量复制的过程。因其具有快速、准确、所需模板量少等特点，目前已成为生物医学技术和生物纳米
重要的研究手段。华大基因(bgi)基于rca方法形成的dna纳米球(dnb)的测序方法，扩增发生的错误率不累积，从而在测序准确性的源头上就优于其他测序平台，得到了越来越广泛的应用。但是，由于dnb需要以单链环状dna为模板制备而成，在文库制备中需要额外增加单链环化的制备过程，增加了文库制备的复杂度。具体而言，在样品制备中，必须先得到单链环状dna，其文库制备流程包括dna提取，打断，加接头，pcr扩增(可选)，纯化，单链环化，纯化等步骤。如图1所示，现有制备dnb的技术中，双链dna经变性后的单链两端与介导序列(splint oligo)互补配对，在t4连接酶的作用下环化，然后消化线性dna并进行磁珠纯化，之后再在phi 29聚合酶的作用下滚环扩增(rca)得到dnb。...

【技术保护点】

1.一种测序文库制备方法，其特征在于，所述方法包括：将双链DNA和介导序列在同一体系中依次进行变性和退火，其中，所述介导序列与变性的单链DNA两端互补配对，在连接酶的作用下使所述单链DNA两端连接，在聚合酶的作用下以所述介导序列为引物、以所述单链DNA为模板进行滚环扩增反应，得到测序文库。

2.根据权利要求1所述的测序文库制备方法，其特征在于，所述双链DNA为PCR扩增核酸样本得到的双链DNA。

3.根据权利要求1所述的测序文库制备方法，其特征在于，所述双链DNA为连接产物，其中，所述连接产物为核酸样本打断后加上接头的DNA。

4.根据权利要求3所述的...

【技术特征摘要】

1.一种测序文库制备方法，其特征在于，所述方法包括：将双链dna和介导序列在同一体系中依次进行变性和退火，其中，所述介导序列与变性的单链dna两端互补配对，在连接酶的作用下使所述单链dna两端连接，在聚合酶的作用下以所述介导序列为引物、以所述单链dna为模板进行滚环扩增反应，得到测序文库。

2.根据权利要求1所述的测序文库制备方法，其特征在于，所述双链dna为pcr扩增核酸样本得到的双链dna。

3.根据权利要求1所述的测序文库制备方法，其特征在于，所述双链dna为连接产物，其中，所述连接产物为核酸样本打断后加上接头的dna。

4.根据权利要求3所述的测序文库制备方法，其特征在于，所述方法在核酸样本加接头后进一步包括pcr扩增步骤。

5.根据权利要求3所述的测序文库制备方法，其特征在于，所述方法在核酸样本加接头后不包括pcr扩增步骤。

6.根据权利要求1所述的测序文库制备方法，其特征在于，在所述体系中引入所述聚合酶，进行所述滚环扩增反应。

7.根据权利要求1所述的测序文库制备方法，其特征在于，所述介导序列为两种或两种以上序列，分别与双链dna变性后的两条单链dna两端互补配对，生成滚环扩增反应模板。

8.根据权利要求1所述的测序文库制备方法，其特征在于，所述介导序列为一种序列，与双链dna变性后的一条单链dna两端互补配对，生成滚环扩增反应模板。

9.根据权利要求1所述的测序文库制备方法，其特征在于，所述连接酶是t4 dna连接酶；所述聚合酶是phi 29聚合酶。

10.根据权利要求1所述的测序文库制备方法，其特征在于，所述变性在95℃进行；所述退火在40℃进行。

11.根据权利要求1所述的测序文库制备方法，其特征在于，所述体系中还引入atp为所述连接酶提供能量。

12.一种测序文库制备反应体系，其特征在于，所述反应体系包括：双链dna，介导序列，连接酶，聚合酶以及缓冲液...

【专利技术属性】
技术研发人员：廖莎，陈奥，章文蔚，徐崇钧，沈寒婕，何琳，许军强，
申请(专利权)人：青岛华大智造科技有限责任公司，
类型：发明
国别省市：