一种原代细胞培养用组织预处理组合物及应用制造技术

本发明专利技术属于生物技术领域，具体涉及一种原代细胞培养用组织预处理组合物及应用。所述预处理组合物的原料包括：溶菌酶、金属离子络合剂、蔗糖和基础溶媒。制备方法包括先用蔗糖水溶液溶解溶菌酶，用0.9％氯化钠注射液溶解EDTA‑2Na；最后在基础溶媒中加入上述配制的溶液，混匀即得。本发明专利技术制得的预处理组合物在室温条件下作用30min，对组织样本进行预处理，可有效降低组织样本相关的微生物污染风险，大大提高原代细胞培养的成功率；且避免了组织保存液及细胞培养过程中抗生素的引入，具有良好的应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物，具体涉及一种原代细胞培养用组织预处理组合物及应用。

技术介绍

1、从组织样本分离培养获取原代细胞是一项应用广泛的生物学技术。而微生物污染一直是组织培养面临的主要问题。现有技术多在组织保存液及原代细胞培养过程中添加多种抗生素以降低微生物污染风险，提高原代细胞培养成功率。

2、细胞培养过程中引入抗生素的不足在于：1)微生物种类复杂，很难通过一种或几种抗生素的使用进行控制，且耐药现象普遍存在，抗生素作用有限；2)多数抗生素仅能发挥暂时抑制微生物生长的作用，可掩盖低水平、隐蔽性的污染，在细胞培养富营养条件下若突然爆发，将会对整个培养环境的洁净度及其它相关细胞产生不利影响；3)有文献报道：β-内酰胺类抗生素及氨基糖苷类抗生素，对真核细胞培养有抑制增殖作用，并且这种抑制增殖作用在原代细胞和干细胞等难养细胞上尤其明显；抗生素的使用也可能会对基因表达有影响，最终影响实验结果(kaneftel,hubscher,u.effects of beta-lactam antibiotics onproliferating eucaryotic ce本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种原代细胞培养用组织预处理组合物，其特征在于，所述组合物的原料包括：溶菌酶、金属离子络合剂、蔗糖和基础溶媒。

2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述溶菌酶选自鸡蛋清溶菌酶或重组人溶菌酶中的一种或两种；所述金属离子络合剂选自EDTA-2Na。

3.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述基础溶媒选自0.9％氯化钠溶液、DMEM培养基和1640培养基中的至少一种。

4.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述预处理组合物中溶菌酶的浓度为10-20mg/mL，金属离子络合剂的浓度为0.75-1.5mM，蔗糖的浓度为15-40mg/mL...

【技术特征摘要】

1.一种原代细胞培养用组织预处理组合物，其特征在于，所述组合物的原料包括：溶菌酶、金属离子络合剂、蔗糖和基础溶媒。

2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述溶菌酶选自鸡蛋清溶菌酶或重组人溶菌酶中的一种或两种；所述金属离子络合剂选自edta-2na。

3.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述基础溶媒选自0.9％氯化钠溶液、dmem培养基和1640培养基中的至少一种。

4.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述预处理组合物中溶菌酶的浓度为10-20mg/ml，金属离子络合剂的浓度为0.75-1.5mm，蔗糖的浓度为15-40mg/ml。

5.一种权利要求1-4任一项所述的组织预处理组合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴延恒，顾文艺，李雪，
申请(专利权)人：广州智瓴生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：