一种过表达羊源BLOC1S1转基因小鼠的构建方法技术

本发明专利技术公开了一种过表达羊源BLOC1S1转基因小鼠的构建方法，其步骤为：将含有BLOC1S1基因的pCDH慢病毒载体与包装质粒共转染293T细胞，48 h后离心后弃上清，PBS重悬分装。PMSG+HCG超排C57小鼠，体外受精2 h后将慢病毒浓缩液注射至受精卵透明带下，直至透明带明显膨胀变大，受精卵转移至KSOM胚胎培养液继续培养24 h后移植受体，成功获得过表达羊源BLOC1S1转基因小鼠。本发明专利技术为BLOC1S1基因抗布鲁氏菌感染相关机制探索提供了研究模型。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物，具体涉及一种过表达羊源bloc1s1转基因小鼠的构建方法。

技术介绍

1、布鲁氏菌病属兼性胞内寄生革兰阴性菌，通常单个或成对存在，少数成短链状存在，可通过直接接触、间接接触和气溶胶等多种形式感染多数哺乳动物，并逐渐形成流行较为广泛的人畜共患病。养羊业在中国农业发展中占有重要地位，但布鲁氏菌病感染导致母畜不孕流产或公畜睾丸炎是长期阻碍养羊产业高效、快速发展的主要问题。此外，由布鲁氏菌感染导致的布鲁氏菌病作为全球性的人畜共患传染病，一方面造成羊只流产繁殖率下降，同时引起一些地区兽医等从业人员感染，已经成为影响人民安全健康的一个重要疫病。

2、 溶酶体相关细胞器生物合成复合体1亚基1（biogenesis of lysosome-relatedorganelles complex 1 subunit 1, bloc1s1），也被称为blos1/gcn5l1。在动物感染布鲁氏菌后产生的ridd导致bloc1s1基因表达量降低，被认为是布鲁氏菌感染的重要基因，因此，过表达bloc1s1基因可能会有效抵抗布鲁氏菌感染带来的危害。研究表明本文档来自技高网...

【技术保护点】

1. 一种过表达羊源BLOC1S1转基因小鼠的构建方法，其特征在于：将含有BLOC1S1基因的pCDH慢病毒载体质粒、2 μg包装质粒psPAX2和2 μg包膜质粒VSVG共转染293T细胞，48 h后收毒，过滤后离心弃上清，PBS重悬后获得慢病毒浓缩液，病毒滴度达1×107 IU/mL以上，分装后-80 ℃冷冻保存。

2.根据权利要求1所述一种过表达羊源BLOC1S1转基因小鼠的构建方法，其特征在于：使用PMSG+HCG法对4周龄C57雌鼠超数排卵，取成熟卵母细胞，利用获能精子进行体外受精。

3. 根据权利要求1所述一种过表达羊源BLOC1S1转基因小鼠的构建方...

【技术特征摘要】

1. 一种过表达羊源bloc1s1转基因小鼠的构建方法，其特征在于：将含有bloc1s1基因的pcdh慢病毒载体质粒、2 μg包装质粒pspax2和2 μg包膜质粒vsvg共转染293t细胞，48 h后收毒，过滤后离心弃上清，pbs重悬后获得慢病毒浓缩液，病毒滴度达1×107 iu/ml以上，分装后-80 ℃冷冻保存。

2.根据权利要求1所述一种过表达羊源bloc1s1转基因小鼠的构建方法，其特征在于：使用pmsg+hcg法对4周龄c57雌鼠超数排卵，取成熟卵母细胞，利用获能精子进行体外受精。

3. 根据权利要求1所述一种过表达羊源bloc1s1转基因小鼠的构建方法，其特征在于：体外受精2 h后经0.1 %透明质酸酶溶液脱去颗粒细胞，m2培养液清洗3遍后转移至注射微滴，固定卵母细胞，将慢病毒注射至受精卵透明带下，直至慢病毒充满透...

【专利技术属性】
技术研发人员：华进联，王聪亮，万仕成，李娜，雷安民，陈文博，李剑南，张梦菲，
申请(专利权)人：西北农林科技大学，
类型：发明
国别省市：