一种羟基自由基的测定方法技术

本发明专利技术提供一种测定羟基自由基的测定方法。即在水溶液中，羟基自由基氧化夜蓝，夜蓝溶液褪色，对波长６１８ｎｍ处的可见光有选择性吸收，通过测定溶液的吸光度可以得到溶液中羟基自由基的浓度。本发明专利技术的检测方法可检测浓度范围为０．０３９～０．３７９ｍｇ／Ｌ的羟基自由基，具有仪器简单、检测成本低、操作简便快捷、灵敏度高，摩尔吸光系数以双氧水浓度计高达３．６×１０４Ｌ.ｍｏｌ－１.ｃｍ－１等优点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及。具体地说，涉及一种利用萘基二苯甲烷染料-夜蓝作为显色剂，利用分光光度法测定羟基自由基的新方法。
技术介绍
羟基自由基( OH)对生物体毒性强危害大，并且反应活性大，寿命短，存在浓度低。目前，国内外报道的测定羟基自由基的方法有电子自旋共振法、高效液相色谱法、荧光法、共振散射光谱法和分光光度法等。这些方法或仪器昂贵，或灵敏度不够。
技术实现思路
本专利技术的目的是克服上述技术弊端，提供一种具有使用设备简单、检测成本低、操作简便、灵敏度高等优点的羟基自由基的测定方法。 本专利技术的技术原理 在水溶液中，羟基自由基氧化夜蓝，夜蓝溶液褪色，对波长618nm处的可见光有选择性吸收，通过测定溶液的吸光度可以得到溶液中羟基自由基的浓度。 本专利技术的技术方案 —种羟基自由基的测定方法，测定步骤如下 (1)标准曲线的绘制 分别往编号为①到⑥的6个50mL容量瓶中都加入2. 0X 10—4mol L—1的夜蓝水溶液9. 0mL， pH为3. 1 3. 3的磷酸-磷酸二氢钠缓冲溶液5. 0mL， 1. 0X 10—3mol *L—VeSC^水溶液0. 3mL ; 再分别往①到⑤号的5个容量瓶中加入现配制的5. OX 10—4mol L—1的双氧水，其中①号中加入0. 2mL双氧水，②号中加入0. 4mL双氧水，③号中加入0. 6mL双氧水，④号中加入O. 8mL双氧水，⑤号中加入l.OmL双氧水；⑥号中不加双氧水，作为参比液； 将①到⑥号分别充分混匀，静置15min后，用蒸馏水定容，摇匀；用lcm比色皿，用⑥号作参比，测定618nm处①到⑤号的5个容量瓶中溶液的吸光度； 以吸光度为纵坐标，双氧水浓度为横坐标，绘制标准曲线； (2)回归方程的获得根据步骤(1)的标准曲线获得回归方程A = 1. 07C(mg L—"-0. 0038 ;其中A为吸光度；C为双氧水摩尔浓度； (3)羟基自由基的测定 往50mL容量瓶中加入2. OX 10—4mol L-1夜蓝水溶液9. OmL， pH为3. 1 3. 3的磷酸_磷酸二氢钠缓冲溶液5. OmL， 1. OX 10—3mol L—卞^04水溶液0. 3mL，加入可产生羟基自由基的物质，充分混匀，静置15min后，用蒸馏水定容，摇匀，用lcm比色皿，用步骤(1)中的⑥号作参比，测定618nm处溶液的吸光度，根据步骤(2)的回归方程计算羟基自由基的浓度； 其中加入可产生羟基自由基的物质的量按其最终含羟基自由基浓度为0. 039 0. 379mg/L计算。 本专利技术的测定方法当H202浓度为0. 17mg L—、相对误差小于5%时，以下离子允许量为(mg L—0 :K+(2000) 、 Ca2+(2000) 、 Sn2+(2000) 、 Al3+(2000) 、 Pb2+(2000) 、 N03—(20 00)、S042—(2000) 、 NH4+(2000) 、 Br—(2000) 、 HC204—(2000) 、 H2B03—(20 00) 、 H4P301(T (2000)、拧檬酸根(2000) ， Ni+(100) 、 Cu2+(100) 、 Co2+(100) 、 Mn2+(100) 、 Cr3+(100) ， CI—(5000) ， Fe3+(400)，F—(30)，硅酸氢根(1000) ， Ag+(0. 05) ， Hg2+(0. 03) ， Cd2+(0. 05) ， Mn7+(0. 2) ， Cr6+(0. 6)。以上离子浓度上限未做。 本专利技术的有益效果 目前国内外报道的测定羟基自由基的方法有电子自旋共振法、高效液相色谱法、荧光法、共振散射光谱法和分光光度法等。这些方法或仪器昂贵，或灵敏度不高，本专利技术采用夜蓝为显色剂，分光光度法测定羟基自由基，可检测浓度范围为0. 039 0. 379mg/L的羟基自由基，该方法具有仪器简单、检测成本低、操作简便快捷、灵敏度高，摩尔吸光系数以双氧水浓度计高达3. 6X 104L mo1—1 cm—1等优点。具体实施例方式下面通过实施例对本专利技术进一步阐述，但并不限制本专利技术。 本专利技术检测方法所用的仪器 UV757CRT紫外可见分光光度计(上海精密科学仪器有限公司)ras-2C型精密酸度计(上海雷磁仪器厂) JA2003型电子天平(上海精科天平厂) 本专利技术检测方法所用的试剂 FeS04、 H202、 H3P04和NaH2P04均为分析纯 商品化夜蓝(C. I 44085) 实施例1 (1)标准曲线的绘制 分别往编号为①到⑥的6个50mL容量瓶中都加入2. OX 10—4mol L—1的夜蓝水溶液9. OmL， pH为3. 1 3. 3的磷酸-磷酸二氢钠缓冲溶液5. OmL， 1. OX 10—3mol *L—VeSC^水溶液0. 3mL ; 再分别往①到⑤号的5个容量瓶中加入现配制的5. OX 10—4mol L—1的双氧水，其中①号中加入0. 2mL双氧水，②号中加入0. 4mL双氧水，③号中加入0. 6mL双氧水，④号中加入O. 8mL双氧水，⑤号中加入l.OmL双氧水； ⑥号中不加双氧水，作为参比液； 将①到⑥号分别充分混匀，静置15min后，用蒸馏水定容，摇匀； 用lcm比色皿，用⑥号作参比，测定618nm处①到⑤号的5个容量瓶中溶液的吸光度； 以吸光度为纵坐标，双氧水浓度为横坐标，绘制标准曲线； (2)回归方程的获得 根据步骤(1)的标准曲线获得回归方程A = 1. 07C(mg L—O-O. 0038 ;其中A为吸光度；C为双氧水摩尔浓度； (3)羟基自由基的测定往50mL容量瓶中加入含乳化剂2. 0 X 10—4mol *L—1夜蓝水溶液9. OmL， pH为3. 1 3. 3的磷酸-磷酸二氢钠缓冲溶液5. OmL， 1. OX 10—3mol L—￥^04水溶液0. 3mL，现配制的浓度为5.0X10-W L-1的双氧水O. lmL，充分混匀，静置15min后，用蒸馏水定容，摇匀，用lcm比色皿，用步骤(1)中的⑥号作参比，测定618nm处溶液的吸光度为0. 038，根据步骤(2)的回归方程计算羟基自由基的浓度为0. 039mg/L ; 实施例2 (D标准曲线的绘制 同实施例1 ; (2)回归方程的获得 同实施例1 (3)羟基自由基的测定往50mL容量瓶中加入含乳化剂2. 0 X 10—4mol *L—1夜蓝水溶液9. OmL， pH为3. 1 3. 3的磷酸-磷酸二氢钠缓冲溶液5. OmL， 1. OX 10—3mol L—￥^04水溶液0. 3mL，现配制的浓度为5.0X10-W L-1的双氧水O. 7mL，充分混匀，静置15min后，用蒸馏水定容，摇匀，用lcm比色皿，用步骤(1)中的⑥号作参比，测定618nm处溶液的吸光度为0. 252，根据步骤(2)的回归方程计算羟基自由基的浓度为0. 119mg/L ; 实施例3 (1)标准曲线的绘制 同实施例1 ; (2)回归方程的获得 同实施例1 (3)羟基自由基的测定 往50mL容量瓶中加入含乳化剂2. OX 10—4mol *L—"夜蓝(C. I 44085)水溶液9. OmL，pH为3.本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种羟基自由基的测定方法，其特征在于测定步骤如下：（１）标准曲线的绘制分别往编号为①到⑥的６个５０ｍＬ容量瓶中都加入２．０×１０↑［－４］ｍｏｌ.Ｌ↑［－１］的夜蓝水溶液９．０ｍＬ，ｐＨ为３．１～３．３的磷酸－磷酸二氢钠缓冲溶液５．０ｍＬ，１．０×１０↑［－３］ｍｏｌ.Ｌ↑［－１］ＦｅＳＯ↓［４］水溶液０．３ｍＬ；再分别往①到⑤号的５个容量瓶中加入现配制的５．０×１０↑［－４］ｍｏｌ.Ｌ↑［－１］的双氧水，其中①号中加入０．２ｍＬ双氧水，②号中加入０．４ｍＬ双氧水，③号中加入０．６ｍＬ双氧水，④号中加入０．８ｍＬ双氧水，⑤号中加入１．０ｍＬ双氧水；⑥号中不加双氧水，作为参比液；将①到⑥号分别充分混匀，静置１５ｍｉｎ后，用蒸馏水定容，摇匀；用１ｃｍ比色皿，用⑥号作参比，测定６１８ｎｍ处①到⑤号的５个容量瓶中溶液的吸光度；以吸光度为纵坐标，双氧水浓度为横坐标，绘制标准曲线；（２）回归方程的获得根据步骤（１）的标准曲线获得回归方程：Ａ＝１．０７Ｃ（ｍｇ.Ｌ↑［－１］）－０．００３８；其中Ａ为吸光度；Ｃ为双氧水摩尔浓度；（３）羟基自由基的测定往５０ｍＬ容量瓶中加入２．０×１０↑［－４］ｍｏｌ.Ｌ↑［－１］夜蓝水溶液９．０ｍＬ，ｐＨ为３．１～３．３的磷酸－磷酸二氢钠缓冲溶液５．０ｍＬ，１．０×１０↑［－３］ｍｏｌ.Ｌ↑［－１］ＦｅＳＯ↓［４］水溶液０．３ｍＬ，加入可产生羟基自由基的物质，充分混匀，静置１５ｍｉｎ后，用蒸馏水定容，摇匀，用１ｃｍ比色皿，用步骤（１）中的⑥号作参比，测定６１８ｎｍ处溶液的吸光度，根据步骤（２）的回归方程计算羟基自由基的浓度。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：闻海峰，秦琴，施文健，路荣春，杨琴淋，周艳，
申请(专利权)人：上海理工大学，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]