Including the method, the invention relates to a fluorescent quantitative PCR detection of Prorocentrum: (1) the pretreatment of algae liquid sample: algae liquid, cells were collected, and then washed with buffer after heavy suspension, algae liquid to be treated; (2) fluorescence quantitative PCR primers and primer concentration optimization: the sequence of PM - 1iF:CCCCCATGCAGAGACTCAA, PM - 1iR:CAGCAAGGACAGGCACAGAA; the final concentration of primers: 200nmol / L; (3) cell detection of Prorocentrum: to treat algae liquid after treatment for PCR amplification, and calculate the cell number and DNA content of Prorocentrum minimum according to the regression equation. This method has the advantages of simple operation, friendly to the environment, has the advantages of accurate detection results, the standard curve of high sensitivity and good repeatability, each point standard curve is highly linear, and has good application prospect in the field of identification of algae.
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属微小原甲藻的检测鉴定领域，特别是涉及一种荧光定量PCR检测微小原 甲藻的方法
技术介绍
对赤潮进行预测首要问题是对赤潮藻类进行检测，传统的藻类鉴定是通过形态学 的观察来划分的，从色素，色素体，贮藏物质等的差别来辨别不同种的藻类细胞，这是一件 费时费力的事，而且不同的种属差别很细微，非长期从事该工作的专业人员难以胜任这项 工作，并且环境对藻类形态有很大影响，鉴定到种存在的困难较多。目前，利用分子生物学手段检测微藻的方法日渐成熟，这些方法从分子水平解 决了某些从形态上难以区分的藻类分类和鉴定问题。自从聚合酶链式反应(Polymerase ChainReaction, PCR)技术专利技术以来，这种技术就被应用到诸多领域。许多学者通过微藻 某些基因片段扩增来对藻类进行鉴定，例如通过对核糖体rDNA序列分析，核糖体间隔区 (ITS)的PCR扩增和测序，从而完成对微藻类的种类鉴定，然而这种方法灵敏度不高，而且 无法定量，即不能确定水体中藻细胞数量。荧光原位杂交也是近年来微藻鉴定的检测手段， 有些学者利用核糖体大亚基(LSU)和ITS区分子探针对某些赤潮微藻进行...
【技术保护点】
一种荧光定量ＰＣＲ检测微小原甲藻的方法，包括： （１）藻液的预处理 抽取海域中的样品藻液，离心收集细胞，然后用ｐＨ ７．０的ＰＢＳ缓冲液洗涤两次后重悬，制成密度为２．５×１０↑［８］ｃｅｌｌ／Ｌ的待处理藻液； （２）荧光定量ＰＣＲ引物及浓度优化 ＳＹＢＲ法的荧光定量引物序列为： ＰＭ－１ｉＦ：ＣＣＣＣＣＡＴＧＣＡＧＡＧＡＣＴＣＡＡ， ＰＭ－１ｉＲ：ＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＧＣＡＣＡＧＡＡ； 引物终浓度为：２００ｎｍｏｌ／Ｌ； （３）微小原甲藻的细胞个数和基因组ＤＮＡ检测 取步骤（１）中得到的待处理藻液于离心管中，在冰浴中进行超声波处理，显微镜观察直至所有细...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：张凤英，马凌波，石彦红，蒋科技，马春艳，马洪雨，
申请(专利权)人：中国水产科学研究院东海水产研究所，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。