一种寡核苷酸克隆方法技术

本发明专利技术提供了一种寡核苷酸克隆方法，该方法为寡核苷酸在T4DNA连接酶的作用下，室温孵育5min‑60min，不需要经过退火过程，即可完成克隆。该方法重复性高，与寡核苷酸的序列和长度以及粘性末端无关。该方法可以使用不同公司的T4DNA连接酶进行，并且可以在不同的感受态细胞中复制。本发明专利技术为克隆寡核苷酸提供了一种节省时间和高度可重复性的方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于基因工程领域，具体是涉及一种寡核苷酸克隆方法。

技术介绍

1、自20世纪70年代限制性内切酶的发现和20世纪80年代聚合酶链反应(pcr)技术的专利技术等两项生物技术突破以来，分子克隆技术已经发展成为一种非常强大的dna操作工具，这种技术使我们能够从选定的dna片段中创建重组dna分子。并且是当今生命科学和生物医学研究中必不可少的基础实验室技术。传统的分子克隆是利用t4dna连接酶将线性化的载体与限制性内切酶产生的含有钝端或互补粘性末端的dna片段连接起来。整个过程包括多个步骤，如pcr,dna纯化，酶切，连接和转化，过程复杂时间长。为了简化经典的分子克隆程序，提高克隆效率，人们开发了各种可替代的克隆方法。这些方法包括不依赖于核酸内切酶的topo克隆、不依赖于t4dna聚合酶的连接克隆、重叠延伸pcr克隆、重组介导的gateway克隆和gibson组装。然而，每一种方法都有其局限性，需要进一步优化或开发更多替代方法。

2、寡核苷酸的克隆，如用于基因敲除的shrna或用于crispr/cas9基因组编辑的sgrna，被广泛应用于生物本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种寡核苷酸克隆方法，其特征在于，所述克隆方法是将寡核苷酸在T4DNA连接酶的作用下，室温孵育5min-60min，不需要经过退火过程。

2.根据权利要求1所述的一种寡核苷酸克隆方法，其特征在于，所述寡核苷酸为单链的寡核苷酸或配对的正反义寡核苷酸。

3.根据权利要求1所述的一种寡核苷酸克隆方法，其特征在于，所述室温孵育是指16℃-30℃。

4.根据权利要求1所述的一种寡核苷酸克隆方法，其特征在于，所述寡核苷酸长度为24nt-84nt。

【技术特征摘要】

1.一种寡核苷酸克隆方法，其特征在于，所述克隆方法是将寡核苷酸在t4dna连接酶的作用下，室温孵育5min-60min，不需要经过退火过程。

2.根据权利要求1所述的一种寡核苷酸克隆方法，其特征在于，所述寡核苷酸为单链的寡核苷酸...

【专利技术属性】
技术研发人员：边杉，蔡春海，郭贞明，
申请(专利权)人：同济大学，
类型：发明
国别省市：