【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于基因工程领域，具体是涉及一种寡核苷酸克隆方法。
技术介绍
1、自20世纪70年代限制性内切酶的发现和20世纪80年代聚合酶链反应(pcr)技术的专利技术等两项生物技术突破以来，分子克隆技术已经发展成为一种非常强大的dna操作工具，这种技术使我们能够从选定的dna片段中创建重组dna分子。并且是当今生命科学和生物医学研究中必不可少的基础实验室技术。传统的分子克隆是利用t4dna连接酶将线性化的载体与限制性内切酶产生的含有钝端或互补粘性末端的dna片段连接起来。整个过程包括多个步骤，如pcr,dna纯化，酶切，连接和转化，过程复杂时间长。为了简化经典的分子克隆程序，提高克隆效率，人们开发了各种可替代的克隆方法。这些方法包括不依赖于核酸内切酶的topo克隆、不依赖于t4dna聚合酶的连接克隆、重叠延伸pcr克隆、重组介导的gateway克隆和gibson组装。然而，每一种方法都有其局限性，需要进一步优化或开发更多替代方法。
2、寡核苷酸的克隆，如用于基因敲除的shrna或用于crispr/cas9基因组编辑的sgrna，被广泛应用于生物学或生物医学实验中。为了将这些寡核苷酸插入到载体中，通常需要一个退火程序。这包括加热单链互补义和反义寡核苷酸以破坏随机氢键，然后缓慢冷却以使新键形成具有粘性末端的双链dna，产生的具有粘性末端的双链dna连接成载体。在现有研究中，虽然退火步骤耗时长，但却是不可省去的必要环节，在pcr的扩增程序中，退火也是必不可少的重要步骤，优化或者减少退火环节，从而减少克隆寡核苷酸所需时间的研
技术实现思路
1、本专利技术的目的还在于提供一种寡核苷酸克隆方法。
2、一种寡核苷酸克隆方法，其特征在于，所述克隆方法是将寡核苷酸在t4 dna连接酶的作用下，室温孵育5-60min，不需要经过退火过程。
3、进一步的，所述寡核苷酸为单链的寡核苷酸或配对的正反义寡核苷酸。
4、进一步的，所述室温孵育是指16℃-30℃。
5、进一步的，所述寡核苷酸长度为24nt-84nt。
6、相比于现有技术，本专利技术的有益效果是：
7、本专利技术提供的克隆方法不依赖于退火、不依赖于寡核苷酸序列、粘性末端、寡核苷酸长度、来自不同公司的t4dna连接酶、转化的感受态细胞或进行实验的人。本专利技术为克隆寡核苷酸提供了一种节省时间和高度可重复性的方法。
8、常规pcr程序以及退火步骤需要至少几个小时，本专利技术提供的克隆方法，无需退火或pcr步骤，仅通过单个连接步骤(包括混合配对单链寡核苷酸和dna连接酶)，即可有效地将寡核苷酸插入载体中。
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1.一种寡核苷酸克隆方法，其特征在于，所述克隆方法是将寡核苷酸在T4DNA连接酶的作用下，室温孵育5min-60min，不需要经过退火过程。
2.根据权利要求1所述的一种寡核苷酸克隆方法，其特征在于，所述寡核苷酸为单链的寡核苷酸或配对的正反义寡核苷酸。
3.根据权利要求1所述的一种寡核苷酸克隆方法，其特征在于，所述室温孵育是指16℃-30℃。
4.根据权利要求1所述的一种寡核苷酸克隆方法，其特征在于，所述寡核苷酸长度为24nt-84nt。
【技术特征摘要】
1.一种寡核苷酸克隆方法，其特征在于，所述克隆方法是将寡核苷酸在t4dna连接酶的作用下，室温孵育5min-60min，不需要经过退火过程。
2.根据权利要求1所述的一种寡核苷酸克隆方法，其特征在于，所述寡核苷酸为单链的寡核苷酸...
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