一种NAD(H)类似物依赖型3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶突变体及应用制造技术

本申请公开了一种NAD(H)类似物依赖型3‑羟基‑3‑甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶突变体及应用，氨基酸序列为SEQ ID NO:3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5中的一种。具有选择性好，且适用于多种非天然的NAD(H)类似物。应用于胞内体系时可将小分子的化学能还原力选择性传递到底物氧化的目标代谢物。此外，NAD(H)类似物依赖型HMGR突变体可应用于生物正交代谢途径的构建，实现体内甲羟戊酸途径的能量消耗与内源能量代谢解偶联，从而实现特异性调控MVA途径及萜类合成。因此，本发明专利技术的方法可应用于代谢工程、合成生物学等生物转化领域，具有重要价值。

【技术实现步骤摘要】

本申请涉及一种nad(h)类似物依赖型3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶a还原酶突变体及应用，属于生物。

技术介绍

1、萜类物质是由两个或以上异戊二烯单元衍生得到的一类天然产物，具有生物活性，是天然产物中数量最大的家族之一，目前已发现5000余种萜类物质，在药物、香料、保健品、化妆品及工业中具有广泛的应用。萜类化合物虽然在结构和功能上具有多样性，但是具有共同的前体物质异戊烯焦磷酸(ipp)及其异构体二甲烯丙基焦磷酸(dmapp)。

2、在生物体内ipp或dmapp的合成有两条途径：甲羟戊酸途径(mva途径)和非甲羟戊酸途径(mep途径又称作dxp途径)，其中mva途径存在于所有真核生物和某些古菌和细菌中，3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶a(3-hydroxy-3-methyl glutaryl coenzyme areductase，hmgr，ec：1.1.1.34)为mva途径中的关键酶，其催化的反应式为：

3、(s)-hmg-coa+2nad(p)h+2h+←→(r)-mevalonate+2nad(p)++coa-sh

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【技术保护点】

1.NAD(H)类似物依赖型3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶突变体，其特征在于，所述NAD(H)类似物依赖型3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶突变体的氨基酸序列为SEQ ID NO:3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5中的一种。

2.根据权利要求1所述的NAD(H)类似物依赖型3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶突变体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述受体菌采用为大肠杆菌BL21(DE3)。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述的用于表达所述NAD(H...

【技术特征摘要】

1.nad(h)类似物依赖型3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶a还原酶突变体，其特征在于，所述nad(h)类似物依赖型3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶a还原酶突变体的氨基酸序列为seq id no:3、seq id no：4、seq id no：5中的一种。

2.根据权利要求1所述的nad(h)类似物依赖型3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶a还原酶突变体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述受体菌采用为大肠杆菌bl21(de3)。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述的用于表达所述nad(h)类似物依赖型3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶a还原酶突变体的基因的核苷酸序列如seq id no:2所示。

5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述载体为pet28a(+)。

6.根据权利要求1中所述的nad(h)类似物依赖型3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶a还原酶突变体，根据权利要求2～5的任一种制备方法得到的nad(h)类似物依赖型3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶a还原酶突变体在利用nad(h)类似物进行酶催化反应、氧化还原nad(h)类似物、在细胞内调控甲羟戊酸途径、生产甲羟戊酸及萜类中的应用。

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【专利技术属性】
技术研发人员：赵宗保，薛海曌，王雪颖，胡英菡，
申请(专利权)人：中国科学院大连化学物理研究所，
类型：发明
国别省市：