可溶性血红素结合蛋白CcmE130的表达载体及其表达纯化方法技术

本发明专利技术公开了一种可溶性血红素结合蛋白CcmE130的表达载体及其表达纯化方法。所述方法将去跨膜端序列的CcmE130可溶性蛋白的编码基因通过NcoI及NdeI双酶切连接至pET28a质粒中形成表达载体pCH001。本发明专利技术去除跨膜端蛋白基因得到可溶性血红素结合蛋白CcmE130序列，简化了后续蛋白纯化步骤，提高了可溶性血红素结合蛋白CcmE130的纯化效率，并通过优化CcmE130蛋白在大肠杆菌表达系统中的的表达条件，实现了CcmE130蛋白的大量表达。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于蛋白表达载体的构建，涉及一种可溶性血红素结合蛋白ccme130的表达载体及其表达纯化方法。

技术介绍

1、血红素结合蛋白ccme是一种锚定膜蛋白，氨基端有一疏水的跨膜区，其它亲水的可溶部分位于周质空间，可溶性部分ccme130刚性的桶后连着一个柔性的羧基端结构域，这一羧基端结构域在功能上起着非常重要的作用，帮助血红素的结合，转运给细胞色素c前体以及介导和ccmc、ccmf相互作用，ccme接收ccmc的血红素，并和血红素共价结合，随后把它传递给细胞色素c前体蛋白，由裂合酶ccmf合成成熟的细胞色素c，影响着一系列生理功能，例如电子传递、催化反应、氧气传递及储存、信号传导及基因表达调控等。因此，ccme130蛋白的研究具有重要的意义。

2、然而，ccme蛋白具有n端跨膜结构域，是一种跨膜蛋白，由于纯化步骤复杂，因而纯化效率低，且膜蛋白的大规模制备一直是生物学研究的难点和热点。

技术实现思路

1、本专利技术的目的在于提供一种可溶性血红素结合蛋白ccme130的表达载体及其表达纯化方法，以本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.可溶性血红素结合蛋白CcmE130的表达载体为pCH001，其特征在于，核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，包含：噬菌体T7启动子；大肠杆菌核糖体结合位点；NcoI序列CCATGG、SEQID NO.1所示的大肠杆菌可溶性血红素结合蛋白CcmE130序列以及NdeI位点CATATG；10个组氨酸位点以及终止密码子TAG。

2.根据权利要求1所述的可溶性血红素结合蛋白CcmE130的表达载体的构建方法，其特征在于，具体步骤如下：将SEQ ID NO.1所示的去跨膜端序列的CcmE130蛋白的编码基因通过NcoI及NdeI双酶切连接至pET28a质粒形成表达载体pCH00...

【技术特征摘要】

1.可溶性血红素结合蛋白ccme130的表达载体为pch001，其特征在于，核苷酸序列如seq id no.2所示，包含：噬菌体t7启动子；大肠杆菌核糖体结合位点；ncoi序列ccatgg、seqid no.1所示的大肠杆菌可溶性血红素结合蛋白ccme130序列以及ndei位点catatg；10个组氨酸位点以及终止密码子tag。

2.根据权利要求1所述的可溶性血红素结合蛋白ccme130的表达载体的构建方法，其特征在于，具体步骤如下：将seq id...

【专利技术属性】
技术研发人员：李启迪，卢颖洪，周敏，
申请(专利权)人：南京理工大学，
类型：发明
国别省市：