一种嗜热古菌色氨酸合成酶在磁珠-T4噬菌体衣壳复合载体上的固定化制造技术

本发明专利技术提供一种嗜热古菌色氨酸合成酶在磁珠‑T4噬菌体衣壳复合载体上的固定化。T4噬菌体衣壳可以作为良好的固定化酶生物载体，将其与羧基磁珠成功集成，方便、快速的用于回收固定化酶。在5次回收再利用后仍能保持97.6％的催化活性；在4℃储存9天后，固定化酶仍能保持84.5％的催化活性，远高于游离酶仅剩的14.4％催化活性。本发明专利技术提供的固定化酶为L‑色氨酸类似物的合成提供一个经济高效的范例。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于酶固定化领域，具体涉及一种嗜热古菌色氨酸合成酶在磁珠-t4噬菌体衣壳复合载体上的固定化。

技术介绍

1、l-色氨酸类似物作为药物化学的基石，可以广泛作为化学合成复杂分子的前体以及化学生物学的探针。例如，l-6-氯-色氨酸是用于治疗抑郁症药物的重要前体；l-6-氰基色氨酸作为一种新型蓝色荧光发射体，已被广泛用于生物光谱和显微镜中；l-4-氨基色氨酸是合成抗肿瘤药物indolactam v的重要前体。色氨酸类似物的化学合成是有挑战性的，色氨酸类似物在其结构中存在手性中心，且氨基与羧基是活泼的。young等人以3-氯-苯胺为起始原料，反应步骤长，需要使用大量的保护基团且在-78℃下进行反应。因此，急需一种简单、温和、绿色、高效的方法作为替代。酶法由于合成路线短、反应条件温和等特点受到研究者们的青睐。

2、虽然酶催化反应条件温和，但是游离酶在使用过程中，由于稳定性差、成本高、无法重复利用等特点严重阻碍了在工业大规模生产方面的应用。酶的固定化是提高酶循环利用的有效策略。现有的固定化方法可以分为化学结合法和物理结合法，其中化学结合法是利用载体本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种色氨酸合成酶固定化酶，组成成分包括Soc-Pf0A9融合酶、缺失Soc蛋白的T4噬菌体衣壳和羧基磁珠，所述T4噬菌体衣壳通过EDC和Sulfo-NHS修饰在羧基磁珠表面，Soc-Pf0A9融合酶通过Soc蛋白连接在T4噬菌体衣壳上。

2.权利要求1所述的色氨酸合成酶固定化酶的制备方法，包括以下步骤：

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤2)中的偶联缓冲液为0.1MNa3PO4和0.15M NaCl的混合溶液，pH为8.0。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤2中，羧基磁珠和Sulfo-NHS的混合质量比为5...

【技术特征摘要】

1.一种色氨酸合成酶固定化酶，组成成分包括soc-pf0a9融合酶、缺失soc蛋白的t4噬菌体衣壳和羧基磁珠，所述t4噬菌体衣壳通过edc和sulfo-nhs修饰在羧基磁珠表面，soc-pf0a9融合酶通过soc蛋白连接在t4噬菌体衣壳上。

2.权利要求1所述的色氨酸合成酶固定化酶的制备方法，包括以下步骤：

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤2)中的偶联缓冲液为0.1mna3po4和0.15m nacl的混合溶液，ph为8.0。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤2中，羧基磁珠和sulfo-nhs的混合质量比为5:3。

5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤2)中的edc溶液为：以1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐为溶质，以反应缓冲液为溶剂配制而成，所述反应缓冲液含有0.05m的mes,0.5m的nac...

【专利技术属性】
技术研发人员：高嵩，骆波，王佩，徐渺，陈裕康，果波，
申请(专利权)人：江苏海洋大学，
类型：发明
国别省市：