一种碱基编辑系统及碱基编辑方法技术方案

本发明专利技术涉及生物技术领域，特别是涉及一种碱基编辑系统及碱基编辑方法，所述碱基编辑系统包括：1）C2C9核酸酶和/或编码所述C2C9核酸酶的核酸；2）引导RNA和/或编码所述引导RNA的核酸；3）脱氨酶和/或编码所述脱氨酶的核酸。所述碱基编辑方法包括将靶基因与所述的碱基编辑系统接触，以实现靶基因上单碱基的编辑。本发明专利技术成功实现了靶位点上两种不同类型的单碱基突变，且极大的缩小了碱基编辑系统的核酸编码尺寸，最优的碱基编辑系统其蛋白部分基因尺寸仅为2793bp，远远小于单个AAV能够装载的最大外源基因大小。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物，特别是涉及一种碱基编辑系统及碱基编辑方法。

技术介绍

1、crispr/cas(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/crispr-associated protein)是近年来开发的一种新型基因编辑系统。由于仅由单效应蛋白发挥作用，crispr/cas9和crispr/cas12a两类蛋白成为现在主流的基因编辑工具。cas核酸酶与其对应引导rna特异性结合形成复合体，其中cas蛋白识别原间隔区-相邻基序(pam)，rna通过碱基互补配对靶向识别特定基因组位点并由核酸酶进行靶位点的双链断裂。利用生物体内源或外加的dna修复机制，例如同源重组和非同源重组末端连接的修复机制对断裂的基因组dna进行修复，从而在修复过程中实现对基因组特定位点的编辑。

2、在细胞中，由于双链断裂的基因组会依赖非同源末端连接的修复途径在断裂处产生插入缺失，从而导致目的基因产生移码突变或提前终止，进而破坏目的基因。由于非同源末端连接修复途径效率较高，因此crispr/cas9和本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种碱基编辑系统，其特征在于，所述碱基编辑系统包括：

2.根据权利要求1所述的碱基编辑系统，其特征在于，所述C2C9核酸酶是：

3.根据权利要求2所述的碱基编辑系统，其特征在于，野生型C2C9核酸酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.115所示，和/或，所述C2C9核酸酶的突变体为：AcC2C9 D240A、E332A或D429A突变体中的任一个或多个。

4.根据权利要求1所述的碱基编辑系统，其特征在于，所述的碱基编辑系统识别靶向序列上的PAM序列；和/或，所述碱基编辑系统靶向PAM序列之后长度为12～40bp的核酸片段，优选...

【技术特征摘要】

1.一种碱基编辑系统，其特征在于，所述碱基编辑系统包括：

2.根据权利要求1所述的碱基编辑系统，其特征在于，所述c2c9核酸酶是：

3.根据权利要求2所述的碱基编辑系统，其特征在于，野生型c2c9核酸酶的氨基酸序列如seq id no.1-seq id no.115所示，和/或，所述c2c9核酸酶的突变体为：acc2c9 d240a、e332a或d429a突变体中的任一个或多个。

4.根据权利要求1所述的碱基编辑系统，其特征在于，所述的碱基编辑系统识别靶向序列上的pam序列；和/或，所述碱基编辑系统靶向pam序列之后长度为12～40bp的核酸片段，优选的长度为20bp。

5.根据权利要求4所述的碱基编辑系统，其特征在于，所述pam序列为aan，gan；其中n为简并碱基，代表a、t、c或g任意碱基。

6.根据权利要求1所述的碱基编辑系统，其特征在于，所述引导rna包括：

7.根据权利要求1所述的碱基编辑系统，其特征在于，所述引导rna的序列如seq idno.

8.根据权利要求1所述的碱基编辑系统，其特征在于，所述脱氨酶为胞嘧啶脱氨酶和/或腺嘌呤脱氨酶；优选的，所述脱氨酶通过连接肽与c2c9核酸酶连接，或，所述脱氨酶通过蛋白质与蛋白质相互作用、rna与蛋白质相互作用或化学相互作用中的任一种相互作用与c2c9核酸酶连接。

9.根据权利要求8所述的碱基编辑系统，其特征在于，所述腺嘌呤脱氨酶为dna或rna腺嘌呤脱氨酶；优选的，所述腺嘌呤脱氨酶为tada或tada*或两者的融合体；更优选的，腺嘌呤脱氨酶核苷酸序列如seq id no.139-seq id no.141任一所示，或与seq idn...

【专利技术属性】
技术研发人员：季泉江，马佳诚，陈未中，
申请(专利权)人：上海科技大学，
类型：发明
国别省市：