一种TFAM条件性敲除的细胞系、心肌细胞及其构建方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种TFAM条件性敲除的细胞系、心肌细胞及其构建方法和应用，属于干细胞与再生医学技术领域。本发明专利技术通过敲入外源TFAM组件并敲除内源TFAM组件的方式，构建得到Doxycycline诱导条件性敲除TFAM的细胞系，然后将该细胞系定向分化为心肌细胞，得到Doxycycline诱导条件性敲除TFAM的线粒体损伤心肌细胞模型，进而利用该心肌细胞在体外构建心肌微组织，得到Doxycycline诱导条件性敲除TFAM的线粒体损伤组织模型，最后利用该心肌细胞和组织模型在体外对药物进行筛选。本发明专利技术利用上述心肌细胞构建了稳定的2D和3D线粒体心肌病模型，用于线粒体心肌病的研究和药物筛选等应用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于干细胞与再生医学，具体涉及一种tfam条件性敲除的细胞系、心肌细胞及其构建方法和应用。

技术介绍

1、心脏作为高度动态的器官，其周期性泵血功能离不开心肌细胞中的线粒体能量的供应。线粒体不仅是心肌细胞能量代谢的供给中心，同时也参与细胞内环境缓冲与命运转化调控，一旦其因遗传因素或环境因素受损诱发功能障碍，便会引起从心肌细胞到心肌组织再到心脏整体的级联性功能失常，引起心肌病。临床通常表现为肥厚和扩张型心肌病、心律失常、左心室心肌致密化不全和心力衰竭，在心肌发育过程中心肌对能量需求的增加和成体对能量需求度增高时，线粒体代谢占比上升导致疾病的迅速恶化。线粒体心肌病发病诱因多、病程时间长、致病机制复杂，且临床病程和组织表型存在很大的异质性，而相关疾病建模所依赖的各类动物又无法摆脱种间差异的桎梏，导致目前尚无有效的治疗干预手段应对原发或并发的线粒体心肌病，亟需新的模型为线粒体心肌病的病程解析与病症治疗提供新的视角。

2、线粒体心肌病一般可分为遗传性和继发性。继发性线粒体心肌病，一般都是由于后天线粒体的损伤导致。遗传性线粒体心肌病是由于mtdna本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.由TFAM条件性敲除的Dox-induced-TFAMKO细胞系定向分化得到的心肌细胞。

2.根据权利要求1所述心肌细胞，其特征在于，所述TFAM条件性敲除的Dox-induced-TFAMKO细胞系的构建方法，包括以下步骤：(1)向人类诱导多能干细胞中敲入外源TFAM组件，得Dox-induced-TFAMKI细胞；

3.根据权利要求2所述心肌细胞，其特征在于，步骤(1)中在AAVS1位点靶向敲入外源TFAM组件。

4.根据权利要求2或3所述心肌细胞，其特征在于，步骤(1)中所述外源TFAM组件相比于内源TFAM组件，在TFAM切割位点做同义突变...

【技术特征摘要】

1.由tfam条件性敲除的dox-induced-tfamko细胞系定向分化得到的心肌细胞。

2.根据权利要求1所述心肌细胞，其特征在于，所述tfam条件性敲除的dox-induced-tfamko细胞系的构建方法，包括以下步骤：(1)向人类诱导多能干细胞中敲入外源tfam组件，得dox-induced-tfamki细胞；

3.根据权利要求2所述心肌细胞，其特征在于，步骤(1)中在aavs1位点靶向敲入外源tfam组件。

4.根据权利要求2或3所述心肌细胞，其特征在于，步骤(1)中所述外源tfam组件相比于内源tfam组件，在tfam切割位点做同义突变，并在终止密码子前携带标签。

5.利用tfam条件性敲除的dox-...

【专利技术属性】
技术研发人员：张冬卉，齐炎，汪如香，
申请(专利权)人：湖北大学，
类型：发明
国别省市：