【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于免疫学领域，具体涉及具体涉及到paucimannose特异性抗体的制备以及检测试剂盒。
技术介绍
1、蛋白质n-糖基化是将寡糖链共价连接到新生肽链的特定天冬酰胺位点。根据添加寡糖链的不同，n-糖基化可以分为高甘露糖型，复合型，杂合型以及paucimannose型，前三种是典型的n-糖基化结构，而paucimannose型是一种研究较少的n-糖基化类型，近年来受到越来越多的关注。与典型的n-糖基化修饰不同，paucimannose修饰形成了一类独特的n-糖链，由两个n-乙酰氨基葡萄糖(glcnac)，1-3个甘露糖(man)，0-1个岩藻糖(fuc)以特定连接方式结合形成的少甘露糖型n-糖基化结构，该类糖链修饰的糖蛋白称为pmp(paucimannosidic protein)。各项研究汇总表明，m2f糖型在人类paucimannose中占主导地位。
2、paucimannose在人类先天免疫系统、感染过程，细胞发育以及人类癌症等生理过程中都发挥重要作用。有研究发现paucimannose糖基化对正常中性粒细胞的成熟和发挥功能很重要，而paucimannose糖基化失调会导致先天免疫系统受损，并因此导致个体对炎症和感染的抵抗力降低。此外，其他免疫细胞也有表达pmp的潜力，例如，人巨噬细胞、嗜酸性粒细胞和其他血细胞。paucimannose与不同疾病的炎症和感染有关。最近一项描述与结核病相关的分子糖基化特征的研究显示，在结核分枝杆菌感染的巨噬细胞和细胞膜衍生微粒中，pmp表现出高表达，尤其是携带m2f的糖蛋
3、paucimannose与人体的免疫系统、感染过程，细胞发育甚至肿瘤的形成都有一定的关系，被认为是上述生理与病理发生的生物标志物。目前pmp还没有良好的临床检测手段，虽然通过糖组学的手段可以检测出paucimannose糖链的含量，但该方法存在着检测周期长、成本高、操作复杂、无特异性等缺点。研究报道的一种特异性识别两种paucimannose生物标记物的抗体在制备体外诊断paucimannose相关疾病提供了一个新的突破口。
技术实现思路
1、本部分的目的在于概述本专利技术的实施例的一些方面以及简要介绍一些较佳实施例。在本部分以及本申请的说明书摘要和专利技术名称中可能会做些简化或省略以避免使本部分、说明书摘要和专利技术名称的目的模糊，而这种简化或省略不能用于限制本专利技术的范围。
2、鉴于上述和/或现有技术中存在的问题，提出了本专利技术。
3、因此，本专利技术的目的是，克服现有技术中的不足，提供一种paucimannose特异性抗体，其特征在于：所述抗体，包括m2f-asn-fmoc和m3f-asn-fmoc两种paucimannose生物标记物与载体蛋白klh连接形成糖缀合物进行免疫学试验产生。
4、为解决上述技术问题，本专利技术提供了如下技术方案：一种paucimannose特异性抗体的制备方法：所述抗体的免疫学刺激产生方法，包括，
5、s1、将m2f-asn-fmoc和m3f-asn-fmoc溶于dmf溶液中，制得混合物；
6、s2、将混合物溶于磷酸盐缓冲液/dmf混合溶剂中，加入双琥珀酰亚胺戊二酸酯dsg，得到m2f-asn-dsg和m3f-asn-dsg；
7、s3、向反应容器内加入0.1m ph 8.0磷酸盐缓冲液溶解混合物，紧接着加入载体蛋白klh，得到糖缀合物m2f-asn-dsg-klh和m3f-asn-dsg-klh；
8、s4、将s3反应混合物经过葡聚糖凝胶柱脱盐纯化得到paucimannose生物标记物与载体蛋白连接形成的糖缀合物m2f-asn-dsg-klh和m3f-asn-dsg-klh，免疫试验产生特异性识别生物标记物的抗体。
9、作为本专利技术所述抗体的一种优选方案，包括：所述s1中制得混合物，dmf溶液含有10％的哌啶，在室温条件下，反应1h，脱掉fmoc基团。
10、作为本专利技术所述抗体的一种优选方案，包括：所述s2中通过减压旋蒸除掉反应混合物的溶剂，将混合物溶于0.1m ph8.0磷酸盐缓冲液/dmf(1：4，v/v)混合溶剂中，加入双琥珀酰亚胺戊二酸酯dsg，其与糖链的摩尔比为15：1，在室温下反应3～6h得到m2f-asn-dsg和m3f-asn-dsg。
11、作为本专利技术所述抗体的一种优选方案，包括：所述s3中通过减压旋蒸除去s2的反应混合物溶剂，向反应容器内加入0.1m ph 8.0磷酸盐缓冲液溶解混合物，紧接着加入与糖链摩尔比为1：30的载体蛋白klh，在室温条件下缓慢搅拌反应2.5～3d得到糖缀合物m2f-asn-dsg-klh和m3f-asn-dsg-klh。
12、作为本专利技术所述抗体的一种优选方案，包括：所述脱盐纯化通过sephadex g-50、sephadex g-25分子排阻层析分离和deae sephadexa-25阴离子交换柱分离。
13、作为本专利技术所述抗体的一种优选方案，其中：所述抗体可以特异性识别并结合paucimannose生物标记物。
14、本专利技术的第二个目的是，克服现有技术中的不足，提供一种检测paucimannose在样品中是否存在的检测方法和试剂盒。
15、作为本专利技术所述试剂盒的一种优选方案，其中：所述抗体带有可检测的标记。
16、作为本专利技术所述试剂盒的一种优选方案，其中：所述试剂盒包含第二抗体，其特异性识别本专利技术的抗体。
17、作为本专利技术所述试剂盒的一本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种Paucimannose特异性抗体，其特征在于：所述抗体为M2F-Asn-Fmoc和M3F-Asn-Fmoc两种Paucimannose生物标记物与载体蛋白KLH连接形成糖缀合物免疫试验产生。
2.如权利要求1所述的抗体，其特征在于：所述抗体的免疫刺激产生方法，包括，
3.如权利要求2所述抗体的制备方法，其特征在于：所述S1中制得混合物，DMF溶液含有10％的哌啶，在室温条件下，反应1h，脱掉Fmoc基团。
4.如权利要求2所述抗体的制备方法，其特征在于：所述S2中通过减压旋蒸除掉反应混合物的溶剂，将混合物溶于0.1M pH8.0磷酸盐缓冲液/DMF(1：4，v/v)混合溶剂中，加入双琥珀酰亚胺戊二酸酯DSG，其与糖链的摩尔比为15：1，在室温下反应3～6h得到M2F-Asn-DSG和M3F-Asn-DSG。
5.如权利要求2所述抗体的制备方法，其特征在于：所述S3中通过减压旋蒸除去S2的反应混合物溶剂，向反应容器内加入0.1M pH 8.0磷酸盐缓冲液溶解混合物，紧接着加入与糖链摩尔比为1：30的载体蛋白KLH，在室温条件
6.如权利要求2或6所述抗体的制备方法，其特征在于：所述脱盐纯化通过Sephadex G-50、Sephadex G-25分子排阻层析分离和DEAE SephadexA-25阴离子交换柱分离。
7.一种试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括，本专利技术的抗体和第二抗体；所述试剂盒的第二抗体，能特异性识别本专利技术的抗体。
8.如权利要求7所述的试剂盒，其特征在于：所述抗体和第二抗体带有可检测的标记。
9.如权利要求7所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒可用于检测paucimannose是否存在。
10.如权利要求1或2所述的抗体在制备体外诊断paucimannose相关疾病试剂盒中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种paucimannose特异性抗体，其特征在于：所述抗体为m2f-asn-fmoc和m3f-asn-fmoc两种paucimannose生物标记物与载体蛋白klh连接形成糖缀合物免疫试验产生。
2.如权利要求1所述的抗体，其特征在于：所述抗体的免疫刺激产生方法，包括，
3.如权利要求2所述抗体的制备方法，其特征在于：所述s1中制得混合物，dmf溶液含有10％的哌啶，在室温条件下，反应1h，脱掉fmoc基团。
4.如权利要求2所述抗体的制备方法，其特征在于：所述s2中通过减压旋蒸除掉反应混合物的溶剂，将混合物溶于0.1m ph8.0磷酸盐缓冲液/dmf(1：4，v/v)混合溶剂中，加入双琥珀酰亚胺戊二酸酯dsg，其与糖链的摩尔比为15：1，在室温下反应3～6h得到m2f-asn-dsg和m3f-asn-dsg。
5.如权利要求2所述抗体的制备方法，其特征在于：所述s3中通过减压旋蒸除去s2的反应混合物溶剂，...
【专利技术属性】
技术研发人员：王宁，高晓东，
申请(专利权)人：苏州海闾糖生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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