一种磷酸富集型化学交联剂及其制备和应用制造技术

本发明专利技术涉及一种可富集型化学交联剂的制备方法及其应用。本交联剂具有以下功能特点：1)具有磷酸基团，适用于基于固相金属亲和色谱(IMAC)的磷酸化肽富集策略，同时磷酸基团增加了交联剂的亲水性，生物兼容性更好；2)具有两个琥珀酰亚胺酯结构单元，该基团可与蛋白质的赖氨酸残基末端氨基或蛋白质N端氨基发生酰胺化反应，反应条件温和，反应效率高；3)分子骨架结构引入聚乙二醇(PEG)链，可以提高交联剂的亲水性，结合磷酸基团的亲水性，抑制交联剂透过细胞膜引起细胞内蛋白质交联，使其适用于细胞外蛋白质(如细胞表面蛋白质、分泌蛋白质、细胞外囊泡蛋白质)的特异性分析，获得上述蛋白质的结构和相互作用信息。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种可富集型化学交联剂及其制备方法和应用。本专利技术交联剂是一种多功能的化学交联剂，具有一个磷酸富集基团、两个琥珀酰亚胺酯基团。为了获得更丰富的交联信息，在分子骨架中引入peg链以改变分子的交联半径并增加分子的柔性，同时，peg链可以增加分子的亲水特性。在生理条件下，本交联剂的磷酸基团带有负电荷，结合peg链的强亲水性，使得本交联剂无法透过细胞膜，因此可以实现细胞表面蛋白质复合体的结构和相互作用分析以及细胞外成分，如分泌蛋白质和细胞外囊泡蛋白质介导的与细胞间通讯相关相互作用分析。

技术介绍

1、蛋白质是生命活动的执行者，蛋白质结构处在动态变化之中且与其功能密切相关。细胞表面蛋白质在细胞粘附、信号转导、物质交换、免疫应答以及细胞通讯等生命活动中起到非常重要的作用。它们是广泛的药物设计靶标，是细胞间通讯的相互识别位点，是重要的疾病诊断、治疗及预后的标志物分子来源，并常用作特定类型细胞分选和分类的标志物分子。通常情况下，多个蛋白质组成复合物发挥其功能。因此，研究细胞表面蛋白质复合物的结构及相互作用对于了解蛋白质功能、解析细胞间信息交流、解释和预测各本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种磷酸富集型化学交联剂，其化学结构式为：

2.一种权利要求1所述的交联剂的制备方法，其特征在于，具体过程如下：

3.根据权利要求2所述的交联剂的制备方法，其特征在于：步骤一中将反应物化合物0、EDCI、NHS溶于DCM中，化合物0、EDCI与NHS摩尔比控制在1：(3.5-4.5)：(3.5-4.5)，反应温度控制在25-30℃，反应时间控制在24-36h；反应完毕，经液相分离纯化，得到癸三琥珀酰亚胺酯溶液，经旋转蒸发干燥获得癸三琥珀酰亚胺酯(化合物1)。

4.根据权利要求2所述的交联剂的制备方法，其特征在于：步骤二中将癸三琥珀酰亚胺酯(化合物1...

【技术特征摘要】

1.一种磷酸富集型化学交联剂，其化学结构式为：

2.一种权利要求1所述的交联剂的制备方法，其特征在于，具体过程如下：

3.根据权利要求2所述的交联剂的制备方法，其特征在于：步骤一中将反应物化合物0、edci、nhs溶于dcm中，化合物0、edci与nhs摩尔比控制在1：(3.5-4.5)：(3.5-4.5)，反应温度控制在25-30℃，反应时间控制在24-36h；反应完毕，经液相分离纯化，得到癸三琥珀酰亚胺酯溶液，经旋转蒸发干燥获得癸三琥珀酰亚胺酯(化合物1)。

4.根据权利要求2所述的交联剂的制备方法，其特征在于：步骤二中将癸三琥珀酰亚胺酯(化合物1)溶于dmso中，加入相对于化合物03.5-4.5当量的氨基-peg3-羧基，加入相对于化合物010-15当量的tea，继续反应5-30min，反应温度控制在25-30℃；反应完毕，反应液经过柱层析分析纯化，分离填料为200-400目硅胶，流动相为甲醇氯仿混合液，甲醇氯仿体积比控制在1：(2.0-4.0)，除去有机相，得到无色油状液体三peg3-三羧酸(化合物2)。

5.根据权利要求2所述的交联剂的制备方法，其特征在于：步骤三中将化合物2、edci、nhs溶于dmso中，化合物2、edci与nhs摩尔比...

【专利技术属性】
技术研发人员：张丽华，侯国珊，随志刚，高航，江波，陈静，杨开广，张玉奎，
申请(专利权)人：中国科学院大连化学物理研究所，
类型：发明
国别省市：