【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于检测试纸领域，具体公开了一种人绒毛膜促性腺激素检测试纸及其制备方法和应用。
技术介绍
1、人绒毛膜促性腺激素(hcg)，是由胎盘的滋养层细胞分泌的一种糖蛋白，它是由α和β二聚体的糖蛋白组成。分子量为36700的糖蛋白激素，其中α-亚单位为垂体前叶激素所共有；β-亚单位是hcg所特异的。hcg的主要功能就是刺激黄体，有利于雌激素和黄体酮持续分泌以促进子宫蜕膜的形成，使胎盘生长成熟。现代认为hcg是由滋养层过渡型细胞和合体细胞产生的。在妊娠的前8周增殖很快，以维持妊娠。在大约孕8周以后，hcg逐渐下降，直到大约20周达到相对稳定。利用hcg双抗体检测妊龄女性尿液中的hcg含量，在妊娠早期可快速得知结果，是辅助诊断的有效手段。
2、目前常用的人绒毛膜促性腺激素(hcg)检测方法有：胶乳集抑制试验和血凝抑制试验；放射免疫试验(ria)；酶联免疫吸附试验(elisa)；单克隆抗体胶体金试验。检测的样本通常有血液样本和尿液样本等。
3、人绒毛膜促性腺激素检测试纸采用双抗体夹心免疫胶体金层析检测技术，在一定条件下将抗体偶联在试剂金颗粒上。检测时通过粒子上的抗原-抗体反应进行特异性识别，检测人尿液中的人绒毛膜促性腺激素(hcg)含量。产品检测线包被hcg单抗(二抗)，质控线包被羊抗鼠多克隆抗体，胶体金结合垫中含有配对的hcg抗体(一抗)标记的胶体金颗粒。检测时当样本中存在人绒毛膜促性腺激素时，先与金标抗体反应，形成抗原-金标抗体复合物，依靠层析作用在纤维膜上移动，运行至检测线时，遇到包被抗体形成抗体-抗原-
4、正常人的尿液中均含有一定量的蛋白质，尿中蛋白质的分子量范围较广,一般在10kd-70kd之间,其中以20kd-30kd的蛋白质含量最高。当剧烈运动、过度劳累、酗酒或者休息不好，某些炎症疾病造成的体温升高，或者女性月经期出现会反应在尿中蛋白的增加。因此，尿液样本的检测，特别是妊娠期女性尿液样本的检测中，常常由于尿液中其他蛋白的干扰和/或尿液中血液等杂质的干扰给检测结果带来干扰，从而造成检测结果不正确。
技术实现思路
1、为了解决上述问题，本专利技术公开了一种人绒毛膜促性腺激素检测试纸及其制备方法和应用，可选择性过滤尿液中的蛋白质，在有效分离得到目标检测标记物(hcg)的同时，可以去除尿液中其他大分子蛋白和血液等杂质的干扰，使人绒毛膜促性腺激素检测试纸的检测结果更加准确、灵敏。
2、本专利技术的技术方案如下：
3、一种人绒毛膜促性腺激素检测试纸，所述检测试纸为胶体金检测试纸，检测试纸的样品垫和胶体金结合垫中间设置有聚醚砜pes微孔过滤膜。
4、进一步的，上述一种人绒毛膜促性腺激素检测试纸，所述聚醚砜pes微孔过滤膜的规格为0.30-0.45um。
5、进一步的，上述一种人绒毛膜促性腺激素检测试纸，包括样品垫、胶体金结合垫、nc硝酸纤维素膜、pvc胶板、吸水垫、检测线t、质控线c、聚醚砜pes微孔过滤膜；由上而下的，所述聚醚砜pes微孔过滤膜设置在样品垫和胶体金结合垫之间；所述胶体金结合垫设置在pvc胶板的一端，所述吸水垫设置在pvc胶板的一端的另一端，中间由nc硝酸纤维素膜连接；所述检测线t和质控线c间隔一段距离，设置在nc硝酸纤维素膜上。
6、进一步的，上述一种人绒毛膜促性腺激素检测试纸，所述胶体金结合垫上包被有配对的hcg抗体作为一抗，所述检测线t上包被有hcg单抗作为二抗，所述一抗和二抗为两条不同的鼠抗人hcg单克隆抗体igg，所述质控线c上包被羊抗鼠igg多克隆抗体。
7、另一方面，本专利技术提供了上述人绒毛膜促性腺激素检测试纸条的制备方法，包括如下步骤：
8、s1单克隆抗体标记结合物的制备
9、1)胶体金溶液的配制(以1000ml为例)：
10、0.164g/l的氯金酸溶液，0.236g/l的柠檬三酸钠溶液；低速搅拌直至溶液沸腾，冷却后置2～8℃备用。
11、2)标记缓冲液的配制(以1000ml为例)：
12、35.8g/l磷酸氢二钠溶液，ph＝7.5±0.1，过滤置2～8℃备用。
13、3)封闭液的配制：
14、17.9g/l磷酸氢二钠，10g/l peg20000溶液，ph＝7.5±0.1，过滤置2～8℃备用。
15、4)离心液的配制(以1000ml为例)：
16、0.716g/l磷酸氢二钠，0.1g/l的bsa溶液，ph＝7.5±0.1，过滤置2～8℃备用。
17、5)保存液的配制：
18、17.9g/l磷酸氢二钠，10g/l的bsa溶液，ph＝7.5±0.1，过滤置2～8℃备用。
19、6)金标标记(以标记10ml为例)
20、ⅰ.取一个清洁的容量合适的烧杯，做好标识。
21、ⅱ.用洁净量筒准确量取1000ml胶体金溶液，加入已放有磁力搅拌子的洁净烧杯中，并在烧杯上做好标识。
22、ⅲ.将烧杯放置在磁力搅拌器的台面上，轻柔搅拌(以不溅起液滴为宜)；测量待标记胶体金的ph值，搅拌下调节ph，使其最终ph值稳定在7.5±0.05；
23、ⅳ.搅拌下缓慢加入0.1mg鼠抗人hcg单克隆抗体(一抗)，加入完毕时开始计时20分钟；
24、ⅴ.20分钟搅拌标记结束后，搅拌下加入封闭液(约1滴/秒)加入量为10ml，加入完毕时开始计时30分钟，继续搅拌；
25、ⅵ.用离心机离心两次，离心结束后，弃去上清，加入10ml保存液复溶。
26、7)标记结合垫的制备：
27、取配制好的单克隆抗体标记结合液用喷金仪按4μl/cm要求的喷量，喷于空白玻纤上，37℃恒温箱干燥2-6小时，取出用滚刀将结合垫裁成1.0cm宽的长条，干燥避光密封保存备用。
28、s2包被膜的制备
29、1)包被稀释液的配制(以1000ml为例)：
30、划膜稀释液配方：蔗糖1％；na2hpo4.12h2o17.9g/l；氯化钠9g/l；proclin3000.05％，ph7.5。
31、2)检测线包被液的配制及制备：
32、将抗hcg单克隆抗体(二抗)用包被稀释液稀释浓度至0.5mg/ml～2.0mg/ml，用划膜机在硝酸纤维素膜上制备检测线(t线)。
33、3)质控线包被液的配制及制备：
34、将羊抗鼠多克隆抗体用包被稀释液稀释浓度至0.5mg/ml～2.0mg/ml，用划膜机在硝酸纤维素膜上制备质控线(c线)。
35、4)划膜检测线和质控线：
36、划膜机按1μl/cm，在硝酸纤维素膜上制备检测线和质控线。
37、5)包被膜的烘干：
38、将包被了检测线和质控线的硝酸纤维素膜置37±2℃烘箱中干燥12-18小时后收膜，密封干燥保存备用。本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种人绒毛膜促性腺激素检测试纸，其特征在于，所述检测试纸为胶体金检测试纸，检测试纸的样品垫和胶体金结合垫中间设置有聚醚砜PES微孔过滤膜。
2.根据权利要求1所述的一种人绒毛膜促性腺激素检测试纸，其特征在于，所述聚醚砜PES微孔过滤膜的规格为0.30-0.45um。
3.根据权利要求1所述的一种人绒毛膜促性腺激素检测试纸，其特征在于，包括样品垫(1)、胶体金结合垫(2)、NC硝酸纤维素膜(3)、PVC胶板(4)、吸水垫(5)、检测线T(6)、质控线C(7)、聚醚砜PES微孔过滤膜(8)；由上而下的，所述聚醚砜PES微孔过滤膜(8)设置在样品垫(1)和胶体金结合垫(2)之间；所述胶体金结合垫(2)设置在PVC胶板(4)的一端，所述吸水垫(5)设置在PVC胶板(4)的一端的另一端，中间由NC硝酸纤维素膜(3)连接；所述检测线T(6)和质控线C(7)间隔一段距离，设置在NC硝酸纤维素膜(3)上。
4.根据权利要求3所述的一种人绒毛膜促性腺激素检测试纸，其特征在于，所述胶体金结合垫(2)上包被有配对的hCG抗体作为一抗，所述检测线T上包被有hCG单
5.根据权利要求3所述的一种人绒毛膜促性腺激素检测试纸，其特征在于，所述样品垫(1)由以下步骤制备：
6.根据权利要求3所述的一种人绒毛膜促性腺激素检测试纸，其特征在于，所述胶体金结合垫(2)由以下步骤制备：
7.根据权利要求3所述的一种人绒毛膜促性腺激素检测试纸，其特征在于，所述NC硝酸纤维素膜(3)由以下步骤制备：
8.根据权利要求3所述的一种人绒毛膜促性腺激素检测试纸，其特征在于，所述聚醚砜PES微孔过滤膜(8)由以下步骤制备：
9.如权利要求3-8任一项所述的人绒毛膜促性腺激素检测试纸的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
10.如权利要求1-8任一项所述的人绒毛膜促性腺激素检测试纸在非疾病的治疗或诊断中的应用，所述应用中使用的样本为尿液。
...【技术特征摘要】
1.一种人绒毛膜促性腺激素检测试纸，其特征在于，所述检测试纸为胶体金检测试纸，检测试纸的样品垫和胶体金结合垫中间设置有聚醚砜pes微孔过滤膜。
2.根据权利要求1所述的一种人绒毛膜促性腺激素检测试纸，其特征在于，所述聚醚砜pes微孔过滤膜的规格为0.30-0.45um。
3.根据权利要求1所述的一种人绒毛膜促性腺激素检测试纸，其特征在于，包括样品垫(1)、胶体金结合垫(2)、nc硝酸纤维素膜(3)、pvc胶板(4)、吸水垫(5)、检测线t(6)、质控线c(7)、聚醚砜pes微孔过滤膜(8)；由上而下的，所述聚醚砜pes微孔过滤膜(8)设置在样品垫(1)和胶体金结合垫(2)之间；所述胶体金结合垫(2)设置在pvc胶板(4)的一端，所述吸水垫(5)设置在pvc胶板(4)的一端的另一端，中间由nc硝酸纤维素膜(3)连接；所述检测线t(6)和质控线c(7)间隔一段距离，设置在nc硝酸纤维素膜(3)上。
4.根据权利要求3所述的一种人绒毛膜促性腺激素检测试纸，其特征在于，所述胶体...
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