一种通过特异性切刻酶Nt.BstNBI酶切PCR产物制备单链DNA的方法技术

本发明专利技术提供了一种通过特异性切刻酶Nt.BstNBI酶切PCR产物制备单链DNA的方法，属于分子生物学技术领域。本发明专利技术根据Nt.BstNBI特异性切刻酶的酶切位点设计多段重复的DNA序列，DNA序列的两端包含正反向引物的结合序列用于PCR扩增，其中一条引物的5’端进行生物素标记，用于后续的实验。Nt.BstNBI特异性切刻酶识别PCR产物上的切刻位点，将重复序列切刻成2个短片段，短片段的解链温度均低于反应温度，可以从主链中脱落下来，以此PCR产物生成生物素标记的ssDNA。本发明专利技术提供的单链DNA制备方法可在常规实验室以简单、有效、便捷的方式获得单链DNA，避免序列多样性，大大提高了纯度和效率。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及分子生物学，尤其涉及一种通过特异性切刻酶nt.bstnbi酶切pcr产物制备单链dna的方法。

技术介绍

1、单链dna模板在用于单链dna适配子生成的selex组合化学过程以及许多其他分子生物学和生物技术应用中是必需的，这些应用包括传感器、dna芯片和微阵列、焦磷酸测序技术、使用单链构象多态技术(sscp)检测dna点突变、单核苷酸多态(snp)分析、固相dna测序等。单链dna模板还可用于体外诱变、核酸酶s1定位、探针制备和标记、差减杂交及其他多种分子技术。

2、大部分dna以双螺旋结构存在，但一经热或碱处理就会变为单链状态，单链dna在分子流体力学性质、吸收光谱、碱基反应性质等方面都和双链dna不同。由于所需单链dna的大小、规模和纯度不同，单链dna的生产变得非常昂贵或繁重。从双链dna(dsdna)中制备单链dna的方法包括变性尿素-聚丙烯酰胺凝胶、t7逆转录法、不对称pcr、变性高效液相色谱法和链霉亲和素包裹的珠磁分离等。但由于现有制备单链dna的方法耗时较长，并且单链dna的产量很低、仪器和使用的包被磁珠较为昂贵，单本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种通过特异性切刻酶Nt.BstNBI酶切PCR产物制备单链DNA的方法，其特征在于，包含如下步骤：

2.根据权利要求1所述制备单链DNA的方法，其特征在于，所述SMA-F/R*引物对中一条引物的5’端具有生物素标记；

3.根据权利要求1所述制备单链DNA的方法，其特征在于，步骤(2)所述聚合酶链式反应的反应体系为：

4.根据权利要求1所述制备单链DNA的方法，其特征在于，步骤(2)所述聚合酶链式反应的程序为：

5.根据权利要求1所述制备单链DNA的方法，其特征在于，步骤(3)所述特异性内切酶酶切反应的反应体系为：</p>

6.根据...

【技术特征摘要】

1.一种通过特异性切刻酶nt.bstnbi酶切pcr产物制备单链dna的方法，其特征在于，包含如下步骤：

2.根据权利要求1所述制备单链dna的方法，其特征在于，所述sma-f/r*引物对中一条引物的5’端具有生物素标记；

3.根据权利要求1所述制备单链dna的方法，其特征在于，步骤(2)所述聚合酶链式反应的反应体系为：

4.根据权利要求1所述制备单链dna的方法，其特征在于，步骤(2)所述聚合酶链式反应的程序为：

5.根据权利要求1所述制备单链dna的方法，其特征在于，步骤(3)所述特异性内切酶酶切反应的反应体系为：<...

【专利技术属性】
技术研发人员：张屹峰，田庆常，王淑玲，程慧娟，李红秀，徐新刚，徐男，
申请(专利权)人：杭州师范大学，
类型：发明
国别省市：