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一种面向高精度分析外泌体表型的超分辨率三色荧光定位方法技术

技术编号:41682645 阅读:18 留言:0更新日期:2024-06-14 15:35
本发明专利技术公开了一种面向高精度分析外泌体表型的超分辨率三色荧光共定位方法,该方法能够去除由于非特异性吸附产生的荧光信号;该方法结合了目标外泌体的三色荧光标记、三色超分辨率成像和像素计数,像素计数方法是通过MATLAB实现的,可以在单像素水平上消除非特异性结合位点;另外,该方法还实现了外泌体膜蛋白的图谱鉴定。通过标记三种特定蛋白质以获得各种外泌体的3D表型信息;本发明专利技术实现了根据蛋白质表达水平对不同种类的外泌体进行分类;利用SMLM显微镜和像素计数方法,可以最大限度地提高检测的可靠性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及外泌体检测、超分辨成像以及科学计算领域,特别涉及一种面向高精度分析外泌体表型的超分辨率三色荧光定位方法


技术介绍

1、近年来,外泌体已成为癌症最有前途的生物标志物之一。外泌体是一种细胞外囊泡,直径为30-150nm。它们参与细胞通讯、细胞迁移、血管生成和肿瘤细胞生长的过程,并稳定携带蛋白质、脂质、核酸和其他生物活性物质。外泌体膜蛋白的表达水平在生物学功能中起着重要作用。例如,乳腺肿瘤至少有三种根据肿瘤细胞分子谱分类的亚型。来源于其亲本细胞的外泌体的表面蛋白具有特异性,可以反映亲本细胞的生理信息。到目前为止,各种外泌体蛋白已被用于识别肿瘤起源或亚型,以及区分惰性和高风险病变。因此,基于外泌体特异性蛋白对癌症细胞表型进行分析和分类的技术需求很大。

2、荧光免疫测定法是外泌体检测的典型方法。荧光免疫标记是表征表面蛋白表达的主要方法。荧光免疫标记基于抗原-抗体反应的原理。荧光抗体则是通过用荧光素标记某些抗原或抗体产生的。然后,将荧光抗体用作探针,与靶向蛋白形成抗原-抗体复合物,以检测组织、细胞或外泌体中的相应抗原(或抗体)。抗体可以在相本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种面向高精度分析外泌体表型的超分辨率三色荧光共定位方法,其特征在于,包括如下步骤:

2.根据权利要求1所述的面向高精度分析外泌体表型的超分辨率三色荧光共定位方法,其特征在于,步骤1)中所述金纳米球阵列基底的制备方法如下:通过热蒸发在硅晶片上沉积铬层,通过气液界面加载技术,在所得的镀铬的硅片上紧密排列一层聚苯乙烯微球,通过热蒸发在所得的聚苯乙烯微球阵列的表面沉积一层金层。

3.根据权利要求2所述的面向高精度分析外泌体表型的超分辨率三色荧光共定位方法,其特征在于,所述气液界面加载技术具体步骤为:将聚苯乙烯微球溶液与无水乙醇混合,并超声处理,将混合溶液通过载玻片滑...

【技术特征摘要】

1.一种面向高精度分析外泌体表型的超分辨率三色荧光共定位方法,其特征在于,包括如下步骤:

2.根据权利要求1所述的面向高精度分析外泌体表型的超分辨率三色荧光共定位方法,其特征在于,步骤1)中所述金纳米球阵列基底的制备方法如下:通过热蒸发在硅晶片上沉积铬层,通过气液界面加载技术,在所得的镀铬的硅片上紧密排列一层聚苯乙烯微球,通过热蒸发在所得的聚苯乙烯微球阵列的表面沉积一层金层。

3.根据权利要求2所述的面向高精度分析外泌体表型的超分辨率三色荧光共定位方法,其特征在于,所述气液界面加载技术具体步骤为:将聚苯乙烯微球溶液与无水乙醇混合,并超声处理,将混合溶液通过载玻片滑落到去离子水表面,在气液界面形成单层微球膜,滴加十二烷基硫酸钠溶液以固定微球膜,随后,将微球膜从水面转移到硅片上,并在室温下干燥,得到聚苯乙烯微球阵列。

4.根据权利要求2所述的面向高精度分析外泌体表型的超分辨率三色荧光共定位方法,其特征在于,所述铬层的厚度为15nm,所述金层的厚度为15nm。

5.根据权利要求3所述的面向高精度分析外泌体表型的超分辨率三色荧光共定位方法,其特征在于,所述聚苯乙烯微球溶液与无水乙醇以体积比2:1,所述聚苯乙烯微球溶液浓度为5wt%。

6.根据权利要求1所述的面向高精度分析外泌体表型的超分辨率三色荧光共定位方法,其特征在于,步骤1)中所述捕获探针为cd63适配体,其序列为5′-6fam-cac ccc acctcg ctc ccg tga cac taa tgc tat ttt tt-(ch2...

【专利技术属性】
技术研发人员:宗慎飞魏金秀王著元崔一平
申请(专利权)人:东南大学
类型:发明
国别省市:

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