核酸分子SI-CYPJ-52及其在制备抗癌药物中的应用制造技术

本发明专利技术属于生物医药领域，涉及一种核苷酸分子及其在制备抗肿瘤药物中的应用。本发明专利技术提供了一种用于制备抗肿瘤药物的核苷酸分子，它具有抑制肿瘤生长的活性并且其序列包括５’－ＣＣＡＧＣＡＡＵＵＵＧＵＣＡＡＧＵＵＡ－３’或者５’－ＣＣＡＧＣＡＡＴＴＴＧＴＣＡＡＧＴＴＡ－３’。在本发明专利技术中被称为ＳＩ－ＣＹＰＪ－５２。本发明专利技术的核苷酸分子ＳＩ－ＣＹＰＪ－５２可以明显抑制肿瘤细胞增殖；施用于裸鼠时，与相同培养条件下的对照裸鼠相比，瘤体的增长明显受到抑制，而且这种现象随着时间的推移日益明显。本发明专利技术为肿瘤的治疗和缓解提供了一种新的途径和手段。

Nucleic acid molecule SI-CYPJ-52 and its application in preparing anticancer medicine

The invention belongs to the field of biological medicine, relating to a nucleotide molecule and its application in preparing antitumor drugs. The present invention provides a method for preparing antineoplastic nucleic acid molecules, it can inhibit tumor growth and activity of the sequence comprises 5 'or 5' 'CCAGCAATTTGTCAAGTTA3 CCAGCAAUUUGUCAAGUUA3'. In the present invention is called SICYPJ52. The invention of the nucleotide molecule SI CYPJ 52 can inhibit the proliferation of tumor cells; applied to nude mice when compared with control mice under the condition of the same culture, the tumor growth was significantly inhibited, and this phenomenon is more evident as time goes on. The present invention provides a new approach and means for the treatment and remission of tumors.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物医药领域，涉及一种核苷酸分子及其在制备抗肿瘤药物中的应用。
技术介绍
肿瘤疾病现已上升为世界第2号〃杀手〃，其死亡人数仅次于心血管病。几年来， 国外医学界对于肿瘤疾病的发病机理在细胞基础上又有了新的认识。基于对肿瘤发 病机制的进一步理解，人们利用各种途径来研制和开发能够特异，有效地杀伤肿瘤细 胞而对正常细胞无毒性的药物。目前，对于癌症的治疗仍以化疗及放疗为首选，两 者虽对肿瘤的治疗取得了相当的疗效，但由于缺乏对肿瘤细胞的特异性因而具有较大 的毒副作用以及某些肿瘤细胞对化疗和放疗处理的不敏感，因此在很大程度上限制了 它们在临床中的应用。近年来，为了开发出能特异性地杀伤癌细胞而对正常细胞无 毒负作用的药物，人们对癌症的发病机制从细胞，分子水平上的研究予以高度重视和 巨额投资。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种用于制备抗肿瘤药物的核苷酸分子。 本专利技术的另一个目的是提供上述核苷酸分子的应用。本专利技术提供了一种用于制备抗肿瘤药物的核苷酸分子，它具有抑制肿瘤生长的 活性并且其序列包括5， -CCAGCAAUUUGUCAAGUUA-3'或者5， - CCAGCAATTTGTCAAGTTA -3'。在本专利技术中被称为SI-CYPJ-52。其中，A、 T、 U、 G和C分别是腺嘌呤核苷酸、胸腺嘧啶核苷酸、尿嘧啶核苷酸、 鸟嘌呤核苷酸和胞嘧啶核苷酸。在本专利技术中，术语核苷酸分子SI-CYPJ-52 该术语还包括 5， -CCAGCAAUUUGUCAAGUUA-3'或者5' - CCAGCAATTTGTCAAGTTA -3'的核苷酸序列 变异形式。这些变异形式包括若干个(通常为1-15个，较佳地1-10个，更佳地1-5 个)核苷酸的缺失、插入和/或取代，以及在5'和/或3'端添加数个(通常为IO个以 内，较佳地为5个以内)核苷酸。例如，在5， -CCAGCAAUUUGUCAAGUUA-3'后(3 '端) 加入若干dT (脱氧胸苷)后形成的序列。本专利技术中，SI-CYPJ-52可以是具有抑制肿瘤生长的活性并且包括 5， -CCAGCAAUUUGUCAAGUUA-3' dTdT的序列。本专利技术中，SI-CYPJ-52可以是具有抑制肿瘤生长的活性并且是 5' -CCAGCAAUUUGUCAAGUUA-3' dTdT的序列。本专利技术中，SI-CYPJ-52可以是具有抑制肿瘤生长的活性并且是5' _ CCAGCAATTTGTCAAGTTA -3' 的序列。在本专利技术中，可选用本领域已知的各种载体，如市售的载体，与SI-CYPJ-52连 接成为重组载体。例如，可以采用慢病毒、腺病毒或者森林脑炎病毒表达系统(Semliki Forest Virus)。慢病毒(Lentivirus)属于逆转录病毒亚属，以人类免疫缺陷病毒 (human i鹏unod efficiency virus, HIV)为代表.慢病毒不仅具有感染分裂耙 细胞并整合其基因组中，尤其是具有感染包括神经元细胞、巨噬细胞、肝细胞、心肌 细胞和干细胞等在内的多种非分裂细胞能力，因而，慢病毒载体已作为基因转移的有 效工具，被广泛应用于基因功能尤其是基因治疗的研究。另一方面，本专利技术还提供了上述的核苷酸分子SI-CYPJ-52的制备方法，即按 SI-CYPJ-52的序列，将各核糖核酸分子依次脱水縮合。本专利技术的核苷酸分子SI-CYPJ-52可以采用各种常规的制备方法制备。本专利技术的 核苷酸分子SI-CYPJ-52序列通常可以用酶解法或人工合成的方法获得。本专利技术还提供了上述的核苷酸分子SI-CYPJ-52在制备抗肿瘤药物中的应用。 实验表明，本专利技术的SI-CYPJ-52可明显抑制肿瘤细胞增殖。将SI-CYPJ-52或 者含有SI-CYPJ-52的细胞施用于裸鼠，与相同培养条件下未施用SI-CYPJ-52的裸鼠(所用的干扰RNA正向序列为GCCAGCAATTTGTCAAGTTA)相比，前者瘤体的增长明显 受到抑制，而且这种现象随着时间的推移日益明显。本专利技术的核苷酸分子SI-CYPJ-52及其类似物，当在治疗上进行施用(给药)时， 可提供不同的效果。通常，可将这些物质配制于无毒的、惰性的和药学上可接受的水 性载体介质中，其中pH通常约为5-8，较佳地pH约为6-8，尽管pH值可随被配制 物质的性质以及待治疗的病症而有所变化。配制好的药物组合物可以通过常规途径进 行给药，其中包括(但并不限于)肌内、腹膜内、皮下、皮内、或局部给药。以本专利技术的核苷酸分子SI-CYPJ-52为例，可以将其与合适的药学上可接受的载 体联用。这类药物组合物含有治疗有效量的化合物和药学上可接受的载体或赋形剂。 这类载体包括(但并不限于)盐水、缓冲液、葡萄糖、水、甘油、乙醇、及其组合。 药物制剂应与给药方式相匹配。本专利技术的核苷酸分子SI-CYPJ-52可以被制成针剂形 式，例如用生理盐水或含有葡萄糖和其他辅剂的水溶液通过常规方法进行制备。诸如 片剂和胶囊之类的药物组合物，可通过常规方法进行制备。药物组合物如针剂、溶液、 片剂和胶囊宜在无菌条件下制造。活性成分的给药量是治疗有效量，例如每天约1微 克/千克体重-约10毫克/千克体重。此外，本专利技术的SI-CYPJ-52还可与其他治疗剂一起使用。当本专利技术的核苷酸分子SI-CYPJ-52被用作药物时，可将治疗有效剂量的该多肽 施用于哺乳动物，其中该治疗有效剂量通常至少约10微克/千克体重，而且在大多数 情况下不超过约8毫克/千克体重，较佳地该剂量是约10微克/千克体重-约l毫克/千克 体重。当然，具体剂量还应考虑给药途径、病人健康状况等因素，这些都是熟练医师 技能范围之内的。本专利技术中，所述的抗肿瘤药物是由含有效治疗量的核苷酸分子SI-CYPJ-52和药 学上的载体或者赋形剂组成的药物组合物。所述药物组合物可以是针剂或者片剂。其 有效治疗量可以为每天1微克/千克至10毫克/千克体重。本专利技术中，所述药物可以是针剂、粉剂或者片剂。本专利技术的核苷酸分子SI-CYPJ-52可以明显抑制肿瘤细胞增殖；施用于裸鼠时， 与相同培养条件下的对照裸鼠相比，瘤体的增长明显受到抑制，而且这种现象随着时 间的推移日益明显。本专利技术为肿瘤的治疗和缓解提供了一种新的途径和手段。具体实施例方式实施例一 SI-CYPJ-52抑制肿瘤细胞增殖LV-CYPJ-RNAi是携带靶向CYPJ小发夹状RNA(sh-RNA)的病毒载体，而 LV-non-silencing是携带对照片段的病毒载体。慢病毒从上海吉凯基因技术有限公 司购得。病毒感染肝癌细胞株SK-H印1: (A)实验前一天分别接种3 5X103个目的细胞 于96孔培养板中，所加培养基体积为IOO W。 (B)实验时取-70'C保存的病毒在冰上 融化，按照需要稀释病毒。(C)从培养箱中拿出细胞弃去原培养液，用50W无血清 培养基清洗细胞，然后加入50W无血清培养基后，加入病毒稀释液50W。培养液总 体积为100W，混匀后放于37。C培养。48 h后换为含血清的正常培养基。(D)在病 毒感染72h后用倒置荧光显微镜观察GFP绿色荧光(或者RFP红色荧光)，检测病毒 对目的细胞的感染情况。结果显示，感染率达到70%以上，细胞生长明显减缓。实施例二抑制裸鼠肿本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种核苷酸分子，其特征在于，它具有抑制肿瘤生长的活性并且其序列包括５’－ＣＣＡＧＣＡＡＵＵＵＧＵＣＡＡＧＵＵＡ－３’或者５’－ＣＣＡＧＣＡＡＴＴＴＧＴＣＡＡＧＴＴＡ－３’。

【技术特征摘要】
1. 一种核苷酸分子，其特征在于，它具有抑制肿瘤生长的活性并且其序列包括5’-CCAGCAAUUUGUCAAGUUA-3’或者5’-CCAGCAATTTGTCAAGTTA-3’。2. 如权利要求l所述的一种核苷酸分子，其特征在于，它具有抑制肿瘤生长 的活性并且其序列包括5， -CCAGCAAUUUGUCAAGUUA-3' dTdT。3. 如权利要求l所述的一种核苷酸分子，其特征在于，它具有抑制肿瘤生长 的活性并且其序列是5， -...

【专利技术属性】
技术研发人员：余龙，陈帅，张明君，
申请(专利权)人：复旦大学，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]