C2H7的Fab片段与CD20抗原表位多肽的复合物制造技术

本发明专利技术提供了一种抗人Ｂ细胞表面ＣＤ２０分子的单克隆抗体Ｃ２Ｈ７的Ｆａｂ片段与ＣＤ２０抗原表位多肽的复合物，获得所述复合物的方法，以及所述复合物的三维晶体结构及其应用。本发明专利技术提供的复合物的三维晶体结构的分析结果不仅揭示了Ｃ２Ｈ７和抗原表位肽相互作用的关键残基，并且，为设计和改造Ｃ２Ｈ７以及其它由２Ｈ７衍生的抗体以得到更高亲和力和更高特异性的抗体提供了理论基础，可用于基于所述复合物的结构的药物的虚拟改造。另外，本发明专利技术提供复合物中，ＣＤ２０抗原表位肽段呈现独特的环状结构，可用于筛选针对该表位的新的抗体。

C2H7 Fab fragment and CD20 epitope polypeptide complex

The present invention provides a monoclonal antibody C2H7 against human B cell surface molecule CD20 Fab fragment and CD20 antigen epitope polypeptide compound, method for obtaining the complex, three-dimensional crystal structure and the compound and its application. Analysis of three-dimensional crystal structure of compound provided by the invention not only reveals the key residues C2H7 and antigenic peptide interactions, and for the design and modification of C2H7 derived from 2H7 and other antibodies with higher affinity and higher specific antibody and provides a theoretical foundation for virtual reconstruction the structure of the compound drugs based on the. In addition, the present invention provides a CD20 antigen epitope peptide segment in a complex that exhibits a unique ring structure that can be used to select new antibodies targeted at the epitope.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于抗体药物
，具体地说，是关于一种抗人B细胞表面的CD20分子 的单克隆抗体C2H7的Fab片段与CD20抗原表位多肽的复合物，获得所述复合物的方法， 以及所述复合物的三维晶体结构及其应用。
技术介绍
人CD20是一类表达于B细胞表面的标记分子(Stashenko， P., L. M. Nadler, etal. (1980). J. Immunol. 125(4): 1678-85)。它是一个四次跨膜的蛋白，被预测有一个大的胞外环区(从 142位赖氨酸到182位的酪氨酸)，并且可以在B细胞表面寡聚化(Bubien, J. K., L.丄Zhou, et al. (1993). J. Cell Biol. 121(5): 1121-32; Teeling, J. L， W. J. Mackus, et al. (2006). J. Immunol. 177(1): 362-71.)。尽管CD20的确切功能并不是很清楚，但是很多实验证据显示 CD20的功能很可能是形成或者调节电压门控性钙离子通道(Bubien, J. K., L. J. Zhou, et al. (1993). J. Cell Biol. 121(5): 1121-32)。由于CD20分子具有以下一些性质CD20分子在80% 以上的B细胞淋巴瘤中有表达，但是在干细胞，原B细胞以及一般的浆细胞和其它组织 中没有表达，而且被抗体交联以后并不引起细胞的内吞作用(Anderson, K.C.,M. P. Bates, et al. (1984). Blood 63(6): 1424-33; Press, 0, W,, J. Howell-Clark, et al. (1994). Blood 83(5): 1390-7),使其成为一个非常好的B细胞淋巴瘤的药物靶标分子。2H7是在一株鼠源的抗人CD20的IgG2b(k)单克隆抗体，而C2H7则是将2H7的可 变区与人IgGl (k)的恒定区嵌合所得到的嵌合抗体,具有潜在的应用于淋巴瘤以及自身免 疫性疾病的治疗的药用价值(Liu, A. Y Robinson, R. R et al. (1987). J Immunol 139: 3521-6)。通过嵌合可以降低抗体在人免疫系统内的排斥反应，并且是抗体在人免疫系统 获得介导补体依赖的细胞毒作用和抗体依赖的细胞毒作用。2H7它的抗原表位至今没有明 确的报道，现有的一些实验数据显示它的抗原表位大致定位于人B细胞表面抗原CD20的 胞外区的从163位天冬酰胺到187位谷氨酰胺的区域(Polyak, M.丄and J. P. Deans (2002). Blood 99(9): 3256-62; Teeling, J. L., W. J. Mackus, et al. (2006). J Immunol 177(1): 362-71 )。 尽管己经有多种抗CD20类抗体药物包括Rituximab (嵌合的2B8抗体)，Zevalin (放射性 90Y标记2B8抗体)，Bexxar (放射性1311标记和未标记的Bl抗体)成功上市(Garber, K.(2003). J Natl Cancer Inst 95(3): 189)，但是因为B细胞表面的CD20表达在不同的患者之 间有着显著的差异，对于B细胞表面CD20低表达量的患者来说，现有药物并不能完全达 到预期的治疗效果，因而基于己有抗体获得高亲和性和高特异性的抗体对于CD20表达水 平低的患者的治疗有着重要的意义(Keating, M. and S. O'Brien (2000). Semin Oncol 27(6 Suppl 12): 86-90; McLaughlin, R， F. B. Hagemeister, et al. (2000). Semin Oncol 27(6 Suppl 12): 37-41)。此外，这几种以及其它的一些鼠源的针对CD20的抗体，例如1F5和AT80，被认为 识别CD20上相似的区域(从165位酪氨酸到182位酪氨酸)(Polyak, M. J. and J. P. Deans (2002). Blood 99(9): 3256-62; Teeling, J. L., W. J. Mackus, et al, (2006), J Immunol 177(1): 362-71)。然而这些抗体在功能上还是有差异。比如大部分的抗体结合会使CD20积聚到去 垢剂不溶的脂筏中，但是B1却没有这样的作用。这个性质可能与其介导补体依赖性的细 胞杀伤作用相关，但与其引起细胞凋亡的能力无关(Deans,丄P., S. M. Robbins, et al. (1998). J Biol Chem 273(1): 344-8; Chan, H. T., D. Hughes, et al. (2003). Cancer Res 63(17): 5480-9; Cragg， M. S., S. M. Morgan, et al. (2003). Blood 101(3): 1045-52)。为了解CD20抗体的功能多样性以及其潜在的机制，鉴定2H7以及其它识别CD20的 单克隆抗体的抗原表位在近几年引起广泛的兴趣，人源化的2H7抗体Ocrelizumab (罗氏 公司)被称誉为下一代的抗CD20类药物。人和鼠的CD20分子的序列对比显示尽管两者 有73%的序列一致性，但是在胞外环区的43个氨基酸中只有16个相同(Polyak, M. J. and J. P. Deans (2002). Blood 99(9): 3256-62)。突变实验显示出人CD20上的170位的丙氨酸和 172位的脯氨酸是决定CD20上2H7所识别的抗原表位的关键(Polyak, M. J. and J. P. Deans (2002). Blood 99(9): 3256-62)。肽段相互作用实验显示CD20上从165位酪氨酸到182位 酪氨酸是潜在的2H7抗体结合的表位(Teeling, J. L., W. J. Maekus, et al. (2006). J Immunol 177(1): 362-71)。因此，构建C2H7的Fab片段与CD20抗原表位多肽的复合物可以给开发C2H7的药 用价值提供理论依据，对于在已有C2H7抗体的基础上进行进一步的改造以获取更高亲和 力的抗体药物，并且对于CD20胞外区的抗原空间表位信息的揭示和依据此空间表位的药 物设计有着重要的提示意义。
技术实现思路
本专利技术的一个目的在于，提供一种单克隆抗体C2H7的Fab片段与CD20抗原表位多 肽的复合物。本专利技术的另一个目的在于，提供一种C2H7的Fab片段与CD20抗原表位多肽的复合 物的制备方法。本专利技术的又一个目的在于，提供一种C2H7的Fab片段与CD20抗原表位多肽形成的 复合物的三维晶体结构。本专利技术的还有一个目的在于，提供一种C2H7的Fab片段与CD20抗原表位多肽形成 的复合物的三维晶体结构的用途。为实现上述目的，专利技术人设计并合成了 CD20从163位天冬酰胺到187位谷氨酰胺的 肽段，并且，在肽本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种抗体与抗原的复合物，其特征在于，所述抗体为Ｃ２Ｈ７的Ｆａｂ片段，所述抗原为ＣＤ２０抗原表位多肽。

【技术特征摘要】
1、一种抗体与抗原的复合物，其特征在于，所述抗体为C2H7的Fab片段，所述抗原为CD20抗原表位多肽。2、 如权利要求l所述的复合物，其特征在于，所述复合物为共结晶复合物。3、 如权利要求1所述的复合物，其特征在于，所述的CD20抗原表位肽的氨基酸序 列为NIYNCEPANPSEKNSPSTQYCYSIQ 。4、 如权利要求3所述的复合物，其特征在于，所述的CD20抗原表位肽的2个半胱 氨酸之间有一个链内二硫键。5、 如权利要求1一4中任一项所述复合物的制备方法，其特征在于，所述复合物通过 共结晶方法获得。6、 如权利要求5所述的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤A、 C2H7的Fab和CD20抗原表位肽混合；B、 共结晶。7、 如权利要求5或6所述的方法，其特征在于，所述的CD20抗原表位肽的氨基酸 序列为N...

【专利技术属性】
技术研发人员：丁建平，杜嘉木，钟琛，
申请(专利权)人：中国科学院上海生命科学研究院，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]