军曹鱼精子超低温保存方法技术

本发明专利技术属于水产养殖技术领域，特别是一种军曹鱼精子超低温保存方法，该方法是将采集的新鲜精液按体积比１∶３的比例与精子保存液逐步稀释并混和均匀，在２０秒内完成，然后平置于液氮液面上预冷５分钟，预冷温度－７０～－８０℃，然后再放入－１９６℃的液氮中长期保存；使用时将保存的精子在３７～４０℃温度下解冻，时间３～４秒，再移入精子活化液中活化，然后进行授精。本发明专利技术的军曹鱼精子超低温保存方法，有助于提高军曹鱼精子利用率，增加苗种繁育量，提高经济效益。该技术不仅可以用于鱼类人工繁育，对于开展鱼类资源恢复与重建也具有重要的意义。

Cobia sperm cryopreservation method

The invention belongs to the technical field of aquaculture, especially a cobia sperm cryopreservation method, this method is to collect fresh semen in the volume ratio of 1 to 3 and the proportion of sperm preservation liquid gradually diluted and mixed, completed in 20 seconds, and then placed in liquid nitrogen on pre cooling for 5 minutes, pre cooling temperature - 70 to - 80 DEG C, and then into the liquid nitrogen to 196 DEG C for long-term preservation; use the stored sperm at 37 to 40 DEG thawing time 3 ~ 4 seconds, and then into the sperm activation solution activation and fertilization. The preservation method of the present invention cobia sperm cryopreservation is helpful to improve the utilization rate of cobia increased sperm, seed breeding, improve economic efficiency. This technique can be used not only for artificial breeding of fish, but also for the recovery and reconstruction of fish resources.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于水产养殖
，特别是一种。
技术介绍
目前，军曹鱼养殖生产所需的苗种全部来自于人工繁育，而人工繁殖经常会出现 雌雄鱼成熟不一致或性比不当导致精子不能充分利用的问题。而且，鱼类精子质量、数量存 在季节性变化，导致阶段性受精率不足。因此，开发应用精子保存技术，有助于提高军曹鱼 精子利用率，增加苗种繁育量，提高经济效益。 关于鱼类精子的保存， 一般分为常温、低温和超低温等三种方法。常温保存可将精 子寿命延长几分钟至几小时；低温保存可将精子寿命延长几天至十几天；超低温保存则是 在-196t:条件下，让精子的运动和代谢完全停止，理论上可以无限期的保存，解冻复活后恢 复授精能力。国外研究者已经对大西洋比目鱼、大菱鲆、虹鳟、金头鲷、尖吻鲈、大西洋鳕等 少数几种海水鱼类的精子超低温保存技术开展了研究。国内的相关研究主要侧重于鲫鱼、 南方鲇、鲤鱼等淡水鱼类。迄今，国内外关于军曹鱼精子超低温保存方面的研究尚未见报 道。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了克服上述现有技术存在的不足，提供一种军曹鱼精子超低温 保存方法。为了实现上述专利技术目的，本专利技术采取的技术方案是该是将采集的新鲜精液按体积比l : 3的比例与精子保存液逐步稀释并混和均匀，在20秒内完成，然后平置于液氮液面上预冷5分钟，预冷温度-70 -S(TC，然后再放入-196 t:的液氮中长期保存；使用时将保存的精子在37 4(TC温度下解冻，时间3 4秒，再移入精子活化液中活化，然后进行授精。 所述精子保存液的配方及配制方法 精子保存基液的配方NaCl 65 75mmol/l、KCl 1. 45 1. 5mmol/l、CaCl22. 5 2. 7mmol/l、NaHC03 20 25mmol/l、 MgCl2 5. 7 6. lmmol/l、葡萄糖150 200mmo1/1 ;小 牛血清9. 4 10mg/ml，按配方制备精子保存基液，然后调ffl值至7. 8，再加入9 10%体 积的抗冻剂，得到精子保存液； 所述活化液配方为NaCl 7. 6 8g/l， KC1 0. 4 0. 45g/l， CaC12 2H200. 18 0. 19g/l， NaHC03 0. 35 0. 4g/l MgS04 0 . 09 0. 10g/l， KH2P04 0 . 06 0. 07g/l， Na2HP04 0. 045 0. 05g/l， D-glucose 0.8 1.2g/l。 所述活化液配方为NaCl 8g/l， KC1 0. 4g/l， CaC12 2H20 0. 185g/l， NaHC03 0. 35g/l， MgS04 0 . 098g/l， KH2P04 0 . 06g/l， Na2HP04 0 . 048g/l， D-glucose lg/l。 所述抗冻剂为二甲亚枫。 本专利技术的，有助于提高军曹鱼精子利用率，增加苗种繁育量，提高经济效益。该技术不仅可以用于鱼类人工繁育，对于开展鱼类资源恢复与重建 也具有重要的意义。附图说明 图1是本专利技术技术流程图。 具体实施例方式准确配制精子保存基液和精子活化液，精子保存液的配方及配制方法先配制精 子保存基液，精子保存基液的配方氯化钠(NaC1)65 75mmol/l、氯化钾(KC1) 1. 45 1. 5mmol/l、氯化牵丐(CaCl2)2. 5 2. 7mmol/l、碳酸钠(NaHC03) 20 25mmol/l、氯化镁(MgCl 2)5. 7 6. lmmol/l、葡萄糖150 200mmol/l、小牛血清9. 4 10mg/ml，按配方制备精子 保存基液，用lmo1/1的碳酸氢钠将精子保存基液的pH值调至7. 8，再加入9 10%体积的 二甲亚枫作为抗冻剂，得到精子保存液。 精子活化液的配方所述活化液配方为氯化钠(NaCl) 8g/1 ，氯化钾(KCl)O. 4g/ 1 ，氯化牵丐(CaC12 2H20) 0. 185g/l ，碳酸氢钠(NaHC03) 0. 35g/l ，硫酸镁(MgS04) 0. 098g/l ，磷 酸二氢钾(KH2P04)0 . 06g/l，磷酸氢二钠(Na2HP04)0 . 048g/l，D-葡萄糖(D-glucose) lg/1 。 将精子保存液置于碎冰上，将采集的新鲜精液按l : 3比例与精子保存液逐步稀 释并混和均匀，应在20秒内完成，平置于液氮液面上预冷5分钟，预冷温度约-80°C ，然后再 投入-196t:的液氮中长期保存。应用时，将保存的精子在4(TC左右温水中解冻3-4秒，再 移入装有精子活化液的容器中涡旋2-3秒以混和均匀，立即进行授精。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种军曹鱼精子超低温保存方法，其特征是将采集的新鲜精液按体积比１∶３的比例与精子保存液逐步稀释并混和均匀，在２０秒内完成，然后平置于液氮液面上预冷５分钟，预冷温度－７０～－８０℃，然后再放入－１９６℃的液氮中长期保存；使用时将保存的精子在３７～４０℃温度下解冻，时间３～４秒，再移入精子活化液中活化，然后进行授精。

【技术特征摘要】
一种军曹鱼精子超低温保存方法，其特征是将采集的新鲜精液按体积比1∶3的比例与精子保存液逐步稀释并混和均匀，在20秒内完成，然后平置于液氮液面上预冷5分钟，预冷温度-70～-80℃，然后再放入-196℃的液氮中长期保存；使用时将保存的精子在37～40℃温度下解冻，时间3～4秒，再移入精子活化液中活化，然后进行授精。2. 据权利要求1所述军曹鱼精子超低温保存方法，其特征是所述精子保存液的配方及 配制方法精子保存基液的配方NaCl 65 75,1/1、 KC1 1. 45 1. 5,1/1、 CaCl22. 5 2. 7mmol/l、NaHC03 20 25mmol/l、 MgCl2 5. 7 6. lmmol/l、葡萄糖150 200mmo1/1 ;小 牛血清9. 4 10mg/ml，按配方制备精子保存基液，然后调ffl值至7. 8，再加入9 10%体 积的抗冻剂，得到精子保存液。3. 据权利要求1所述军曹鱼...

【专利技术属性】
技术研发人员：汤保贵，陈刚，张建东，周晖，施钢，潘传豪，黄建盛，
申请(专利权)人：广东海洋大学，
类型：发明
国别省市：44[中国|广东]