一种构建全长tRNA测序文库的接头、试剂盒及全长tRNA测序文库的构建方法技术

本发明专利技术提供了一种构建全长tRNA测序文库的接头、试剂盒及全长tRNA测序文库的构建方法，涉及高通量测序技术领域。本发明专利技术所述3’接头序列满足下述至少一项条件：(1)在3’接头的5’端添加2～3个随机碱基；(2)在3’接头序列中引入5～8个碱基的条形码序列。本发明专利技术的3’接头进行tRNA连接，利用接头所带条形码对样本进行区分，可以实现混样测序，降低成本；同时通过在接头5’端添加随机碱基，降低接头连接过程的偏好性，建库效果和成本效益均有很大提升。另外，本发明专利技术在进行3’接头连接前先对tRNA分子进行去磷酸化，使3’末端变为3’OH，可以和接头的5’PHO进行连接，提高连接效率和检测覆盖度。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于高通量测序，具体为一种构建全长trna测序文库的接头、试剂盒及全长trna测序文库的构建方法。

技术介绍

1、转录rna(transfer ribonucleicacid，trna)在连接mrna转录和蛋白质翻译过程中扮演着重要的“桥梁”角色。其自身作为多拷贝基因，也受到复杂的基因表达调控，其丰度和表达种类对生物系统响应外界环境，进而调控蛋白质翻译有重要作用，对细胞内的trna进行系统、准确的组学水平定量，对机制解析相关的基础研究和蛋白质合成相关的应用转化都至关重要。高通量转录组测序技术的发展在过去几十年里取得了巨大的突破，大大拓宽了我们对rna世界的认知。然而，目前对高度修饰或有复杂折叠结构的非编码rna，如trna等，尚缺乏成熟稳定的高通量检测技术。虽然近年来对trna进行高通量测序的方法不断更新，但仍有很大的改进空间。

2、trna作为多拷贝基因，且序列复杂度较低，有些不同trna的转录本仅有几个碱基的差别，因此只有测定全长的trna序列才能进行精准定量。然而，由于trna具有特殊的二级结构以及复杂多样的修饰，这些特征使得普本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种构建全长tRNA测序文库的接头，其特征在于，所述接头包括3’接头，所述3’接头序列满足下述至少一项条件：(1)在3’接头的5’端添加2～3个随机碱基；(2)在3’接头序列中引入5～8个碱基的条形码序列。

2.根据权利要求1所述的接头，其特征在于，所述3’接头序列如SEQ ID NO.1或SEQ IDNO.2所示。

3.一种用于构建全长tRNA测序文库的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1或2所述的接头。

4.权利要求1或2所述的接头或权利要求3所述的试剂盒在构建全长tRNA测序文库中的应用。

5.一种全长tRNA测序文库的构...

【技术特征摘要】

1.一种构建全长trna测序文库的接头，其特征在于，所述接头包括3’接头，所述3’接头序列满足下述至少一项条件：(1)在3’接头的5’端添加2～3个随机碱基；(2)在3’接头序列中引入5～8个碱基的条形码序列。

2.根据权利要求1所述的接头，其特征在于，所述3’接头序列如seq id no.1或seq idno.2所示。

3.一种用于构建全长trna测序文库的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1或2所述的接头。

4.权利要求1或2所述的接头或权利要求3所述的试剂盒在构建全长trna测序文库中的应用。

5.一种全长trna测序文库的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：对提取的总rna进行氧化、β消除后分离trna；对分离trna去甲基化、去3’磷酸化后连接权利要求1或2所述的3’接头；再分离trna，进行5’磷酸化处理后连接5’接头；最后反转录为cdna、扩增、测序即可。

6.根据权利要求5...

【专利技术属性】
技术研发人员：王奕蓉，于峰，刘冰雪，舒淙瑶，
申请(专利权)人：湖南大学，
类型：发明
国别省市：