一种基于自组装荧光RNA适配体等温扩增一锅法检测SARS-CoV-2的方法技术

本发明专利技术提供了一种基于自组装荧光RNA适配体SRB2结合RTF‑EXPAR一锅法检测SARS‑CoV‑2的方法，涉及功能核酸生物传感器检测领域。RTF‑EXPAR是RTF(无逆转录)和EXPAR(指数扩增)两个反应组成。靶标RNA启动RTF‑EXPAR，无需逆转录，指数扩增得到大量的扩增片段。SRB2被分裂成两个无功能的片段(命名为splitI和splitII)，并在splitI的3’端和splitII的5’端添加了可与扩增片段碱基互补的侧翼链。SARS‑CoV‑2激活RTF‑EXPAR得到扩增片段，同时在T7RNA聚合酶作用下转录出splitI和splitII。splitI、splitII识别并结合扩增片段，自组装恢复SRB2正确的二级结构，与染料SR‑DN结合并开启荧光。该方法灵敏度高、特异性强、无需标记，可30分钟检测出SARS‑CoV‑2，有望成为病毒的POCT的新方案。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于功能核酸生物传感器检测领域，本专利技术涉及一种检测sars-cov-2的方法，尤其涉及一种基于自组装荧光rna适配体结合等温扩增检测sars-cov-2的方法。

技术介绍

1、一种快速检测sars-cov-2的方法有助于准确地诊断感染者，便于隔离和治疗，有效控制病毒传播。对于保护公众健康，促进科学研究，应对疫情挑战具有重要意义。

2、实时荧光定量pcr被认为是临床检测的黄金标，但它需要在实验室环境中使用热循环仪，且步骤繁琐，耗时较长，限制了床旁检测的使用。目前，已开发出多种恒温扩增方法替代pcr。例如：重组酶聚合酶扩增(rpa)，环介导等温扩增(lamp)，链置换扩增(sda)，催化发夹组装(cha)等。然而，这些等温扩增诊断无法避免非特异性扩增造成的假阳性现象。这个问题可以通过序列特异性检测模块来解决。常见的例子包括使用分子信标和crispr-cas系统。分子信标是基于dna的荧光探针，可通过碱基互补来检测核酸，通常设计为发夹结构。crispr-cas系统通过引入一种名“cas蛋白”的酶和一种名为“引导rna”的rna序列，实现本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种基于自组装荧光RNA适配体等温扩增一锅法检测SARS-CoV-2的方法，所述方法包括以下步骤：

2.根据权利要求1中所述的方法，其中所述探针Binder X特异性结合目标SARS-CoV-2N基因组核心序列形成RNA/DNA双链，且形成RNA/DNA双链含有BstNI核酸内切酶的酶切位点5′CC/WGG′3(W为A/T)。

3.根据权利要求1-2中所述的方法，其中RNA/DNA双链被BstNI切割产生的切割片段Trigger X，与Template X’-X杂交形成DNA双链。

4.根据权利要求1-3中所述的方法，其中DNA双链在DNA聚合酶作...

【技术特征摘要】

1.一种基于自组装荧光rna适配体等温扩增一锅法检测sars-cov-2的方法，所述方法包括以下步骤：

2.根据权利要求1中所述的方法，其中所述探针binder x特异性结合目标sars-cov-2n基因组核心序列形成rna/dna双链，且形成rna/dna双链含有bstni核酸内切酶的酶切位点5′cc/wgg′3(w为a/t)。

3.根据权利要求1-2中所述的方法，其中rna/dna双链被bstni切割产生的切割片段trigger x，与template x’-x杂交形成dna双链。

4.根据权利要求1-3中所述的方法，其中dna双链在dna聚合酶作用下按照5′→3′补全双链。被补全的dna双链含有nt.bbvci酶切位点5′cc/tcagc′3。

5.根据权利要求1-4中所述的方法，被补全的dna双链被nt.bbvci切割再次产生的切割片段trigger x，形成循环。

6.根据权利要求1-5中所述的方法，所述的引物templat...

【专利技术属性】
技术研发人员：应站明，彭佳敏，李翔，
申请(专利权)人：湘潭大学，
类型：发明
国别省市：