一种大肠杆菌T7表达系统的半安慰诱导方法技术方案

本发明专利技术提供一种大肠杆菌T7表达系统的半安慰诱导方法，实现大肠杆菌以葡萄糖为主要碳源，并利用乳糖及其代谢产物为有效诱导物的基因线路。该方法以野生型E.coli BL21(DE3)为宿主，借助组成型启动子pdc过表达非特异性糖转运通道基因secY(ΔP),secE,secG,sCVE和乳糖异构酶基因lacZ，构建不受葡萄糖CCR效应影响的乳糖转运及分解途径；随后，利用葡萄糖CCR效应遏制半乳糖激酶基因galk表达，阻断半乳糖磷酸化的下游代谢途径，形成诱导物半乳糖的稳定积累；最后，通过检测T7启动子控制下绿色荧光蛋白GFP的荧光强度，实现对该系统中乳糖及其代谢产物诱导效果的验证。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于微生物代谢工程领域，具体涉及一种构建乳糖半安慰型诱导的大肠杆菌的方法。

技术介绍

1、乳糖，化学定义为1,4-o-b-d-半乳糖基d-葡萄糖，是由一分子d-半乳糖和一分子d-葡萄糖缩合形成的二糖，广泛存在于哺乳动物的乳汁中。乳糖较低的经济价值和高环境污染能力，使得提高乳糖及其下游产品的经济价值，将乳糖转化为具有高附加值的工业副产品至关重要。乳糖的微生物发酵是一种绝佳的乳糖利用方式，具体可以根据乳糖在发酵过程中发挥的作用不同，大致分为两类：一种是将乳糖作为生产目的产物的底物碳源；另一种则是将乳糖作为诱导微生物表达某种特定基因或蛋白的诱导剂。乳糖因其价格低廉，诱导条件没有严格限制，可以作为碳源被代谢，且在正常代谢下对细胞无毒性，而成为了一种优秀的iptg替代物。

2、糖类分子进入大肠杆菌细胞，主要依赖糖分子转运系统完成。根据转运方式的不同，可将糖类分pts依赖型和非pts依赖型。pts依赖型的糖会在被转运进胞内的同时实现磷酸化，而非pts依赖型的糖，则是在被转运进胞内后，才会发生磷酸化。当pts依赖型糖与非pts依赖型糖同时存在时，细本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种大肠杆菌T7表达系统的半安慰诱导方法，其特征在于，包括以下步骤：通过组成型启动子pdc过表达secY(Δp),secE,secG,sCVE,lacZ，为大肠杆菌构建不受葡萄糖CCR效应影响的乳糖转运、分解途径，实现葡萄糖乳糖共利用；同时，利用葡萄糖CCR效应遏制半乳糖激酶基因galk表达，阻断半乳糖磷酸化的下游代谢途径，形成诱导物半乳糖的稳定积累，进而实现半安慰型诱导；最后，通过检测T7启动子控制下绿色荧光蛋白GFP的荧光强度，实现对该系统诱导效果的验证。

2.根据权利要求1所述的大肠杆菌T7表达系统的半安慰诱导方法，其特征在于：所述目的基因secY(Δp)基因序列如...

【技术特征摘要】

1.一种大肠杆菌t7表达系统的半安慰诱导方法，其特征在于，包括以下步骤：通过组成型启动子pdc过表达secy(δp),sece,secg,scve,lacz，为大肠杆菌构建不受葡萄糖ccr效应影响的乳糖转运、分解途径，实现葡萄糖乳糖共利用；同时，利用葡萄糖ccr效应遏制半乳糖激酶基因galk表达，阻断半乳糖磷酸化的下游代谢途径，形成诱导物半乳糖的稳定积累，进而实现半安慰型诱导；最后，通过检测t7启动子控制下绿色荧光蛋白gfp的荧光强度，实现对该系统诱导效果的验证。

2.根据权利要求1所述的大肠杆菌t7表达系统的半安慰诱导方法，其特征在于：所述目的基因secy(δp)基因序列如seq id no.1所示,sece基因序列如seq id no.2所示,secg基因序列如seq id no.3所示,scve基因序列如seq id no.4所示,lacz基因序列如seq idno.5所示；所述绿色荧光蛋白gfp所对应的gfp基因的序列如seq id no.6所示；所述组成型启动子pdc基因序列如seq id no.7所示。

3.根据权利要求1所述的大肠杆菌t7表达系统的半安慰诱导方法，其特征在于：包括以...

【专利技术属性】
技术研发人员：范立海，刘宇轩，郭强，陈伟香，郑辉东，
申请(专利权)人：福州大学，
类型：发明
国别省市：