盐酸金刚烷胺含量的高效液相色谱蒸发光散射测定法制造技术

本发明专利技术提供了高效液相色谱蒸发光散射测定盐酸金刚烷胺含量的方法，检测器为蒸发光散射检测器，流动相为醋酸铵溶液与甲醇的组合体系。本发明专利技术技术方法简便、灵敏度高，专属性强，可用于单方或多种复方药物制剂中盐酸金刚烷胺含量的测定。

The content of amantadine hydrochloride high performance liquid chromatography with evaporative light scattering method

The invention provides a high performance liquid chromatography method for the determination of the content of amantadine hydrochloride steaming light scattering detector, ELSD, combination system of mobile phase of ammonium acetate solution and methanol. The technique method of the invention is simple, high sensitivity, strong specificity, can be used to determine the content of one or more compound amantadine hydrochloride in pharmaceutical preparations.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及测定盐酸金刚烷胺含覽的方法，特别是髙效液相色谱蒸发光散射测定含量的 相关技术。
技术介绍
盐酸金刚垸胺化学名称为三环[3. 3. 3. l]癸烷-1-胺盐酸盐。其结构式为分子式C8H9N02 分子量151.16理化性质为白色结晶或结晶性粉末；无臭，味苦；在水或乙醇中易溶，在二氯甲烷中溶解。盐酸金刚烷胺具有抗感冒A型病毒作用， 一直作为抗病毒药用于亚洲流感病毒的预防和 感染治疗。在长期的临床使用中，不仅对其抗流感病毒的疗效给予肯定，而且发现了一些新 用途，如改善帕金森病症状等。目前国内市场上的金刚烷胺品种是口服单方盐酸金刚烷胺， 和复方感冒药，复方中与对乙酰氨基酚、咖啡因等组方。2005年版药典二部中规定其含量测 定方法采用非水溶液滴定法，文献报道有采用酸性染料比色法测定其含量，但这些方法都不 具有专一性，专属性不强，特别是测定复方制剂中盐酸金刚烷胺的含量时，其余成分很容易 影响测定结果的准确性。
技术实现思路
本专利技术就是针对现有技术的不足，采用高效液相色谱法来进行盐酸金刚垸胺含量测定方 法；高效液相色谱法最常用的检测器为紫外检测器，但盐酸金刚烷胺的结构为二环癸烷-1-胺盐酸盐,分子结构无共轭双键，因而在紫外区无吸收。考虑采用蒸发光散射检测器(ELSD)， ELSD是质量检测器，ELSD检测的是不挥发的溶质颗粒，因而其响应值与被测物质的官能团和 光学性质无关。采用蒸发光散射检测器进行盐酸金刚垸胺的含量测定，有效地避免了复方制 剂中其余成分的干扰。本专利技术的目的可以通过以下技术方案实现31、 色谱柱选用规格为250mmX4. 6mm的的KromasilC18柱作为色谱固定相。2、 蒸发光散射检测器漂移管温度40'C，载气(空气)流速2.0bar3、 流动相体系由醋酸铵溶液与甲醇组成。4、 上述醋酸铵溶液浓度范围为0.001 0.01rao1/1，优选为0.005 mo1/1。5、 醋酸铵溶液与甲醇溶液比例优选为(70-80) :(20 30)，更优选为(80:20)。6、 流动相流速为O. 4~1. Oml/min。高效液相色谱法与非水滴定法相比有以下优势(1) 非水滴定法用于复方制剂中的盐酸金刚垸胺含量测定专属性不强，组方中其余成 分的干扰太大。而高效液相蒸发光散射检测法的应用克服了这一缺陷，这由专属性试验色谱 图可知，盐酸金刚烷胺对照品、原料及其复方制剂的色谱图比较，三者盐酸金刚垸胺色谱峰 保留时间保持一致，并且阴性样品未在此位置出峰，不干扰检测。具体图谱见附图。(2) 用高效液相色谱蒸发光测定样品含量，并进行方法学验证，有良好的线性关系， 回收率高，精密度和溶液的日间稳定性良好，并且比滴定法灵敏度更高。(3) 高效液相色谱测定含量较之滴定法所需样品量从几克减少到了几十毫克，减少了 样品的浪费。因此本专利技术技术进步在于方法简便、灵敏度高，专属性强，可用于单方或多种复方药物 制剂中盐酸金刚烷胺含量的测定。 附图说明图l盐酸金刚烷胺对照品溶液HPLC图 图2盐酸金刚烷胺原料样品溶液HPLC图 图3盐酸金刚垸胺复方制剂样品溶液HPLC图 图4盐酸金刚烷胺制剂阴性样品溶液HPLC图 本专利技术的具体试验过程如下 1.仪器与试剂岛津LC-10ATvp泵；迪马SEDEX型低温蒸发光散射检测器，漂移管温度40'C，载气(空 气)流速2.0bar。色谱柱KromasilC18， 250mmX4.6,, 5um 试剂醋酸铵分析纯，甲醇色谱纯，水为二次重蒸水 流动相0.005mol/l醋酸铵溶液-甲醇(75:25) 流速0. 4ml/rain 进样2(M2.测定方法的建立及方法验证 (1)流动相的选择根据蒸发光散射检测器的相关文献， 一般来说，流动相的挥发性越好，方法的灵敏度越 高。中性物质的分析，其流动相一般能满足要求。但绝大多数酸碱化合物的检测都需要缓冲盐，而缓冲盐的挥发性、纯度及浓度将直接影响到ELSD检测的基线水平、基线漂移程度及噪 音大小。缓冲盐挥发性差，纯度低，或浓度高，均会提高基线水平，增大基线漂移程度，从 而降低信噪比；挥发性好，载气流速和漂移管温度较低。因而，用作缓冲盐的盐既要容易挥 发(一般是热分解挥发)，又要具有较高的纯度。通常使用的缓冲盐由醋酸、甲酸、二氟醋酸、 硝酸铵、磷酸氢二铵等组成。根据盐酸金刚垸胺的特性选择缓冲盐与有机溶剂相结合的流动相，缓冲盐选择醋酸铵， 有机相选择甲醇。以醋酸铵缓冲盐和甲醇为基本配比，进行流动相比例的调节，使其达到最 佳状态。分别以醋酸铵的比例、甲醇的比例、醋酸铵溶液的浓度为考察因素，设计正交试验 表，结果见表l。表l流动相选择结果试验^^\醋酸铵浓度 (mol/L)醋酸铵比例A先甲醇比例 100%-A%结果评价10. 0018020峰型较好，可分离20. 0017525峰型较好，可分离30. 0017030峰型较好，可分离40,0016040峰型较差，不能分离50. 0058020峰型好，可分离60. 0057525峰型好，可分离70.0057030峰型好，可分离80. 0056040峰型较好，不能分离90. 018020峰型较好，可分离100. 017525峰型较好，可分离110. 017030峰型较好，可分离120. 016040峰型较好，不能分离130. 058020前沿峰，可分离140.057525前沿峰，可分离150. 057030前沿峰，可分离160. 056040前沿峰，可分离170. 18020前沿峰，可分离180. 17525前沿峰，可分离190. 17030前沿峰，可分离200. 16040前沿峰，不能分离由上表结果可知，醋酸铵溶液与甲醇比例(70-80) :(20~30)，浓度在O. 001-0. Olmol/1 范围内，峰型较好，且分离度R〉1. 5，其中更优选为0.005mol/l醋酸铵溶液-甲醇(75:25)。(2)流速的选择一般来说，采用ELSD检测时，在一定范围内，流动相的流速越低，流动相完全挥发所需 的载气流速越低，形成的溶质颗粒越大，对激光散射能力越强，相应的信号越强。但流速过 低，会造成分析样品出峰太早，影响分离度，流速过高，分析样品出峰太晚，会导致峰型变 差，并加长了分析时间。因此选择流动相流速为O. 1 1.0ml/min，优选为O. 4ml/min，峰型好， 分离度满足分析要求，且保留时间适宜。 (3)方法的验证照1.项下的色谱条件进行相关方法学的验证。A专属性阴性试验取按处方配制的除盐酸金刚垸胺外的阴性溶液，吸取注入高效液相色 谱仪，记录色谱图。结果辅料无干扰。 B线性与范围精密称取盐酸金刚烷胺对照品适量，用水稀释成不同浓度的溶液，按上述色谱条件，分 别吸取20W注入高效液相色谱仪，记录色谱图，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，计算 线性回归方程为A-608952C-446673, r=0. 9999 (n=5)，表明盐酸金刚烷胺浓度在0. 201 2.01mg/ml范围内，线性关系良好。C精密度试验照前述色谱条件，取浓度为1. 0mg/ml的盐酸金刚烷胺对照品溶液，重复进样6次，计 算峰面积的相对标准偏差RSD为0. 20%,表明精密度试验结果良好。 D回收率试验取盐酸金刚烷胺约25mg，加入对照品适量本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种盐酸金刚烷胺含量的测定方法，其特征在于用高效液相色谱法测定，检测器为蒸发光散射检测器。

【技术特征摘要】
1、一种盐酸金刚烷胺含量的测定方法，其特征在于用高效液相色谱法测定，检测器为蒸发光散射检测器。2、 根据权利要求l所述的测定方法，其特征在于色谱柱选用规格为250mmX4.6mm的 KromasilC18柱作为色谱固定相。3、 根据权利要求l所述的测定方法，其特征在于其蒸发光检测器漂移管温度为4(TC，载 气(空气)流速2. Obar。4、 根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于其流动相体系由醋酸铵溶液与...

【专利技术属性】
技术研发人员：张玲玲，
申请(专利权)人：北京瑞伊人科技发展有限公司，安英，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]