两面针碱的新用途制造技术

本发明专利技术公开了两面针碱的一种新用途。该用途是两面针碱或其药学上可接受的盐在制备预防和／或治疗肿瘤药物中的应用，特别是在制备预防和／或治疗人肝癌药物中的应用；所述的两面针碱，其结构如式（Ⅰ）所示。抗癌活性实验结果表明两面针碱对癌细胞有较好的抑制作用。５μｇ／ｍｌ的两面针碱对人肝癌细胞ＨＥＰＧ－２的抑制率为６３％。

New uses of nitidine

The present invention discloses a new use of nitidine. This is the use of nitidine or a pharmaceutically acceptable salt thereof by the prevention or treatment of cancer drugs in the application system, especially with the prevention or treatment of human hepatocellular carcinoma application in medicine; nitidine mentioned, the structure as shown in formula (I). The anticancer activity test showed that nitidine had a good inhibitory effect on cancer cells. The inhibition rate of 5 g / ml nitidine base on human hepatoma cell line HEPG 2 was 63%.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及两面针碱的新用途。
技术介绍
端粒DNA是位于染色体末端并对染色体具有保护作用的富含鸟嘌呤(G)的 DNA序列，它由一段双链重复区域和一段单链重复区域构成，人类和哺乳动物的 重复序列单元为TTAGGG。富含G的DNA单链在阳离子的诱导下可以通过G碱 基间Hoogsteen氢键形成四链体(G4)。研究表明，85~90%恶性肿瘤的发病都与 端粒酶的活性有关，而DNAG4结构的形成可以有效抑制端粒酶的活性，进而达到 抑制肿瘤细胞生长的目的。因此，能够诱导DNAG4形成并使之稳定的化合物有望 成为抗肿瘤的先导化合物，成为目前研究的热点。大量研究表明，单链DNA (序歹!j为TTAGGGTTAGGGTTAGGGTTAGGG，简 称为Hum24)在Na+溶液中形成反平行G4结构，在K+溶液中形成平行和反平行共 存的G4混合结构。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供两面针碱的一种新用途。本专利技术所提供的两面针碱的用途是两面针碱或其药学上可接受的盐在制备预 防和/或治疗肿瘤药物中的应用，所述两面针碱的结构式如下式U L所述两面针碱药学上可接受的盐具体可为氯盐。所述两面针碱或其药学上可接受的盐，适合于制备预防和/或治疗人肝癌、肺癌、 腹水癌、鼻咽癌、舌癌的药物，优选为制备预防和/或治疗人肝癌药物。3本专利技术所提供的预防和/或治疗肿瘤的药物，它的有效成分可为式(I )所示的 两面针碱或其药学上可接受的盐。所述两面针碱药学上可接受的盐具体可为氯盐。所述预防和/或治疗肿瘤药物可通过注射、喷射、滴鼻、滴眼、渗透、吸收、物理或化学介导的方法导入机体如肌肉、皮内、皮下、静脉、粘膜组织；或是被其他 物质混合或包裹后导入机体。以两面针碱或其药学上可接受的盐为活性成分的抗肿瘤药物，需要的时候，在 上述药物中还可以加入一种或多种药学上可接受的载体。所述载体包括药学领域常 规的稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性 剂、吸附载体、润滑剂等。用两面针碱或其药学上可接受的盐制备的预防和/或治疗肿瘤药物可以制成注 射液、片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊、口服液、膏剂、霜剂等多种形式。上述各种剂 型的药物均可以按照药学领域的常规方法制备。两面针碱体外抗癌活性实验结果表明两面针碱对癌细胞有很好的抑制作用。浓 度为5pg/ml的两面针碱对人肝癌细胞HEPG-2的抑制率为63%。两面针碱抑瘤机理实验结果表明两面针碱通过诱导人和哺乳动物端粒DNA形 成G4混合结构来抑制肿瘤细胞生长。 附图说明图1为人体端粒DNAHum24在未加入两面针碱和加入两面针碱的条件下构象 变化的圆二色谱图(a) Hum24; (b)加入两面针碱，使Hum24与两面针碱的 摩尔比为1 : 12;每个谱图的摩尔椭圆度为-10—10 (mdeg)。图2 (a)为两面针碱诱导单链Hum24形成G4混合结构的熔点曲线图；(b) 为Na+诱导单链Hum24形成反平行G4结构。 具体实施例方式实施例1 、 MTT还原法检测两面针碱体外抗肿瘤活性实验 MTT法的基本原理为四甲基偶氮唑盐[MTT, 3-(4，5-dimethylthiazol-2-yl) -2,5-diphenyl-tetrazoliumbromide](购自北京化学试剂公司)是一种能接受氢原子的 染料。活细胞线粒体中与NADP相关的脱氢酶在细胞内可将黄色的MTT转化成不 溶性的蓝紫色的formazon，而死细胞则无此功能。用DMSO溶解formazon后，在 一定波长下用酶标仪测定光密度值，即可定量测出细胞的存活率。按照公式可计算肿瘤细胞生长抑制率(％) = (OD对照-OD实验)/OD对照x 100%。 具体操作步骤如下-1) 选用对数生长期的贴壁人肝癌细胞HEPG-2，用0.25 %胰酶消化后，用含10 % 小牛血清的RPMI 1640培养液配制成5000个/ml的细胞悬液，分别接种在96孔培 养板中，每孔接种100nl， 37°C， 5。/。C02培养24h。2) 每孔加入两面针碱(成都思科华有限公司，纯度为98%)溶液10|il，用RPMI 1640培养液补充至每孔终体积为200nl，使每孔中两面针碱终浓度为5pg/ml。设对 照组，加入200^1 RPMI 1640培养液。设空白组，每孔未接种细胞，只加入200^1 RPMI 1640培养液。37°C， 5。/。C02培养3d。实验设三次重复。3) 弃上清液，每孔加入100^1新鲜配制的0.5 mg/ml MTT的无血清培养液，37 。C 继续培养4h。小心弃上清，并加入200^1 DMSO溶解MTTformazon沉淀，用微型 超声振荡器混匀，在酶标仪上测定波长544nm处的光密度值。按照下述公式计算 肿瘤细胞生长抑制率，肿瘤细胞生长抑制率(％) = (OD对照-OD实验)/OD对照 00% (其中OD对照、OD实验为已经扣除OD空白的实验数值)。实验结果表 明5pg/ml的两面针碱对人肝癌细胞HEPG-2的抑制率为63%。实施例2、两面针碱抑瘤机理在无金属离子存在的条件下，溶液中Hum24呈单链构型存在，这种构型在圆 二色谱(CD)中有明显的特征在256nm附近出现一个正峰，在240nm附近出 现一个负峰。当单链Hum24溶液中加入一定浓度两面针碱时，Hum24由单链转化 为一种G4混合结构，在CD谱中有明显的特征为在290nm附近出现一个正峰， 在270 nm附近出现一个正峰。具体的实验方法如下缓冲溶液为由如下终浓度的物质组成的水溶液10 mM Tris-HCl， lmM EDTA; pH 7.4。将30 OD单链Hum24 (上海英俊生物技术有限公 司)(其序列如序列表中序列1所示)溶解在所述缓冲溶液中得到浓度为250 pM的 Hum24母液。将0.5mg两面针碱溶解在所述缓冲溶液中得到浓度为136 两面 针碱母液。将两面针碱母液用所述缓冲溶液稀释成浓度分别为0.2pM、0.6pM、 lpM、 2pM、 4pM、 8pM、 12)iM、 14pM、 16|iM、 18|iM、 20|aM、 22pM的两面针碱溶液。 取250 的单链Hum24溶液分别加入上述浓度的两面针碱溶液，使混合溶液中单链Hum24与两面针碱的摩尔比分别为l : o.i， l : 0.3， l : 0.5， i:i， l : 2， 1:4， l:6， l:7， l:8， l:9， l : io， l: 12。将上述混合溶液，均在25 。C孵育12h，采用圆二色谱仪测定其构象的变化情况。实验结果表明，当单链Hum24与两面针 碱的摩尔比大于等于l :4时都可以明显看到G4混合结构的特征峰。其中，单链 Hum24与两面针碱摩尔比为1 : 12时形成的G4混合结构的圆二色谱图如图1中b 所示。通过变温CD表征由两面针碱诱导形成的G4混合结构的热稳定性。DNA的熔 点(Tm)反映了它的热稳定性。熔点越高说明该DNA越稳定，反之，熔点越低该 结构越不稳定。Hum24G4的熔点是指G4结构分解50。/。时的温度。通过检测此G4 混合结构在290 nm的CD信号随着温度升高的降低来得到它的熔点。具体的实验方法如下将以单链Hum24与两面针碱摩尔比为1 : 6本文档来自技高网...

【技术保护点】
两面针碱或其药学上可接受的盐在制备预防和／或治疗肿瘤药物中的应用，所述两面针碱的结构式如式（Ⅰ）所示：　＊＊＊　式（Ⅰ）。

【技术特征摘要】
1、两面针碱或其药学上可接受的盐在制备预防和/或治疗肿瘤药物中的应用，所述两面针碱的结构式如式(I)所示式(I)。2、 根据权利要求l所述的应用，其特征在于所述两面针碱药学上可接受的盐 为氯盐。3、 根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于所述肿瘤为人肝...

【专利技术属性】
技术研发人员：唐亚林，杨舒，向俊锋，徐广智，
申请(专利权)人：中国科学院化学研究所，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]