一种石油烃氧化菌测试瓶的生产方法技术

本发明专利技术涉及一种石油烃氧化菌测试瓶的生产方法，属应用微生物检测方法技术领域，其特征在于在常温下分别取氯化钠（ＮａＣｌ）１．０％、磷酸二氢钾（ＫＨ↓［２］ＰＯ↓［４］）０．２％、硝酸钾（ＫＮＯ↓［３］）０．１５％、磷酸三钠（Ｎａ↓［３］ＰＯ↓［４］）０．１％、蒸馏水（Ｈ↓［２］Ｏ）９８．５５％，然后依次用蒸馏水（Ｈ↓［２］Ｏ）将其溶解，并加入到容器中混合、充分摇匀，用酸液或碱液将溶液的ｐＨ值调节到７．５，配制成所需的培养液；将所配制的培养液按每瓶４．５ｍｌ装入瓶中，再向瓶中加入０．２ｍｌ的白油，然后加盖、封口、高温灭菌、冷却后即制成石油烃氧化菌测试瓶。本发明专利技术所述的一种石油烃氧化菌测试瓶的生产方法，生产过程简单，可靠性强，经济实用。应用该测试瓶能准确测定待测水样中石油烃氧化菌菌数，提高工作效率。

Production method of test bottle for petroleum hydrocarbon oxidation bacteria

The invention relates to a production method of petroleum hydrocarbon oxidizing bacteria test bottle, which belongs to the technical field of application of microbial detection method, which is characterized in that at room temperature were obtained from sodium chloride (NaCl), 1% (2 KH potassium dihydrogen phosphate: PO: 4), 0.2% potassium nitrate (KNO: 3), 0.15% three sodium phosphate (Na: 3 PO: 4 - 0.1%), distilled water (H: 2 O 98.55%), and then with distilled water (H: 2 O) will be dissolved, and added to the container, fully mixed with acid or alkali and the solution the pH value is adjusted to 7.5, preparation of culture medium to culture medium; the preparation of the 4.5ml press the bottle into the bottle, then add 0.2ml to the white bottle, however After sealing, sealing, high-temperature sterilization and cooling, the test bottle for petroleum hydrocarbon oxidation bacteria is made. The invention relates to a method for producing an oil hydrocarbon oxidation bacteria test bottle, which has simple production process, strong reliability, and is economical and practical. The test bottle can be used to accurately measure the number of bacteria in petroleum hydrocarbon and the work efficiency.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及，属应用微生物检测方 法

技术介绍
在科研和生产的实际工作中，常常需要对微生物的数量进行测定。如对 水体、空气、土壤等环境中的微生物的测定可以监测和评价其污染程度；对 饮用水中的微生物的测定可以评价其是否达标；对菌剂产品进行微生物数量 的测定可判断产品质量是否合格；对油田污水注水中的微生物数量的测定则 可以监测和评价污水注水的水质等。因此，微生物数量的测定对科研和生产 实际工作具有十分重要的指导作用和现实意义。传统的微生物测定方法十分烦琐、费时，工作效率低且不准确可靠。如 平板菌落计数法是根据每个活的细菌能长出一个菌落的原理设计的，取一定 体积的菌悬液，作一系列的倍比稀释，然后将定量的稀释液进行平板培养， 根据培养出的菌落数及稀释倍数，计算出培养物中的活菌数。而绝迹稀释法 是将待测定的水样逐级注入到试管中进行接种稀释，直到最后一个试管中无 菌生长为止，然后根据细菌生长情况和稀释倍数，计算出水样中细菌的数目。 这两种方法都有明显的不足，平板菌落计数法测定结果误差较大，而绝迹稀 释法操作极为繁琐、费时。我国石油资源十分丰富，在石油微生物开采和石油污染生物处理中，石 油烃氧化菌具有十分重要的作用。在微生物采油科学研究、采油菌种产品量检验、微生物采油现场监测、本源微生物采油过程中，常常需要测定石油烃 氧化菌的菌数。石油烃氧化菌的存在与否及其数量多少，在很大程度上决定 着微生物采油成功与否和效果好坏。由此可见，准确测定石油烃氧化菌的菌 数是十分必要的，而现有的传统测试技术和测试手段远不能满足实际生产的 要求。
技术实现思路
为了克服现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种石油烃氧化菌测试 瓶的生产方法，使所生产的测试瓶能够快速准确地测定石油烃氧化菌的菌数， 用于油气勘探开发、尤其是石油微生物开采中石油烃氧化菌数量的测定。本专利技术是通过如下技术方案来实现上述目的的。在常温下分别取氯化钠(NaCl) 1.0 %、磷酸二氢钾(KH2P04) 0.2 %、硝 酸钾(跳)0.15 %、磷酸三钠(Na3P04) 0.1 %、蒸馏水(H20) 98.55 %， 然后依次用蒸馏水(H20)将其溶解，并加入到容器中混合、充分摇匀，用酸 液或碱液将溶液的pH值调节到7.5，配制成培养液；将7ml模制西林瓶清洗 干净、干燥，用液体分装器将所配制的培养液按每瓶4.5ml装入瓶中，再向 瓶中加入0.2ml的白油，然后加盖、封口；将经加盖封口的测试瓶用高温蒸 汽灭菌锅在12rC、 1.05Kg/cii^条件下进行高温灭菌15分钟，冷却后即制成 石油烃氧化菌测试瓶。本专利技术与现有的技术相比具有如下有益效果-1、 本专利技术所述的，生产过程简单， 可靠性强，经济实用。2、 本专利技术所生产的石油烃氧化菌测试瓶能够快速准确地测定石油烃氧化菌的菌数，操作使用简单、结果直接准确。3、本专利技术所生产的石油烃氧化菌测试瓶中只有白油为微生物生长的唯一 碳源，所培养出的微生物只是以白油为唯一碳源的石油烃氧化菌，测试工作 不会受到其它微生物的干扰。 具体实施例方式在常温下(以配制1L培养液为例，以此类推)，分别称取氯化钠(NaCl) 10.0g、磷酸二氢钾(歸04) 2.0g、硝酸钾(跳)1.5g、磷酸三钠(Na3P04) l.Og，然后依次用蒸馏水(H20)将其溶解，并加入到1L容量瓶中混合、再用 蒸馏水(H20)定容到1L刻度线，充分摇匀，用酸液或碱液将溶液的pH值调 节到7.5，即配制成石油烃氧化菌测试瓶所需的培养液。将7ml模制西林瓶清 洗干净、干燥，用液体分装器将所配制的培养液按每瓶4.5ml装入瓶中，再 向瓶中加入0.2ml的白油，然后用A-13型药用胶塞加盖，用普通抗生素玻璃 瓶铝盖经专用封口器封口，最后用高温蒸汽灭菌锅在12rC、 1.05Kg/cm条件 下将测试瓶集中进行高温灭菌15分钟，冷却后即制成石油烃氧化菌测试瓶。采用石油烃氧化菌测试瓶测定待测水样中的石油烃氧化菌的菌数时，系 采用绝迹稀释法原理，将待测水样用无菌注射器逐级注入测试瓶中稀释培养， 直到最后一个测试瓶无菌生长为止，根据稀释的倍数计算出待测水样中细菌 的数目。可采用以下的方法和步骤(1) 准备数支相同的lml医用注射器，用蒸馏水(H20)清洗干净后高温 灭菌(高压蒸汽灭菌锅12rC、 1.05Kg/cii^下灭菌15分钟)，冷却备用。(2) 根据待测水样中石油烃氧化菌的大致多少，将数个上述的石油烃氧 化菌测试瓶排成一组，并依次编上序号l、 2、 3、 4……。(3) 用上述灭菌后的无菌注射器取0. 5mL待测水样并注入到1号石油烃 氧化菌测试瓶内，充分震荡10秒。(4) 另取一支无菌注射器从摇匀后的1号石油烃氧化菌测试瓶内取出 0. 5mL液体注入到2号石油烃氧化菌测试瓶内，充分震荡10秒。(5) 再另取一支无菌注射器从摇匀后的2号石油烃氧化菌测试瓶内取出 0. 5mL液体注入到3号石油烃氧化菌测试瓶内，充分震荡10秒。(6) 依次重复上述操作程序， 一直到最后一ii:为止。(7) 把上述加入待测水样后的一组石油烃氧化菌测试瓶放在30°C (或 现场温度)培养箱内培养，经过7天后观察测试瓶内的变化，判断细菌的生 长情况。(8) 判断标准无菌存在的石油烃氧化菌测试瓶内的培养液无变化，而 有菌存在的石油烃氧化菌测试瓶内的培养液则出现明显浑浊乳化现象，因此， 石油烃氧化菌测试瓶中的培养液出现明显浑浊乳化现象的，表示有石油烃氧 化菌生长。(9) 根据石油烃氧化菌测试瓶内指示细菌生长的情况和有菌生长的测试 瓶的瓶数，査表1可计算出待测水样中的石油烃氧化菌菌数。表l单瓶细菌最大可能值有菌生长测试瓶数菌数/个mL'111—10210—1003100—100041000—10000<table>table see original document page 7</column></row><table>本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种石油烃氧化菌测试瓶的生产方法，其特征在于在瓶内加入由蒸馏水（Ｈ↓［２］Ｏ）、氯化钠（ＮａＣｌ）、磷酸二氢钾（ＫＨ↓［２］ＰＯ↓［４］）、硝酸钾（ＫＮＯ↓［３］）、磷酸三钠（Ｎａ↓［３］ＰＯ↓［４］）等组成的培养液和白油，经加盖封口、高温蒸汽灭菌完成。

【技术特征摘要】
1、一种石油烃氧化菌测试瓶的生产方法，其特征在于在瓶内加入由蒸馏水(H2O)、氯化钠(NaCl)、磷酸二氢钾(KH2PO4)、硝酸钾(KNO3)、磷酸三钠(Na3PO4)等组成的培养液和白油，经加盖封口、高温蒸汽灭菌完成。2、 根据权利要求1所述的一种石油烃氧化菌测试瓶的生产方法，其特征 在于在常温下分别取氯化钠(NaCl) 1.0 %、磷酸二氢钾(KH2P04) 0.2 %、硝 酸钾(認03) 0. 15 %、磷酸三钠(Na3P04) 0. 1 %、蒸馏水(H20) 98.55 %, 然后依...

【专利技术属性】
技术研发人员：易绍金，
申请(专利权)人：长江大学，
类型：发明
国别省市：42[中国|湖北]