一种改进的ARMS引物与Blocker组合体系及其在多重检测中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种改进的ARMS引物与Blocker组合体系及其在多重检测中的应用，所述组合体系中将不同荧光标记的探针修饰在检测目的碱基的ARMS引物上，并在体系中引入覆盖探针结合序列的Blocker，抑制ARMS引物上的探针与靶向序列分子间的结合，ARMS引物上的探针与该ARMS引物延伸产物靶向序列优先形成分子内的结合，释放相应荧光信号。该组合体系中将荧光探针修饰在特异性的ARMS引物上，使引物上的荧光探针与其延伸产物具备更高优先级的分子内结合，达到初步的荧光探针结合产物特异性，同时反应体系中引入了覆盖荧光探针的3’末端封闭序列的Blocker组分，其且具有更高Tm值和体系浓度，从而使荧光探针水解后的ARMS引物延伸产物对探针分子间结合序列优先被Blocker封闭，在应用中，能够实现荧光探针的分子内结合特异性，并消除了分子间荧光非特异性问题。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于分子生物学，具体而言，涉及一种改进的arms引物与blocker组合体系及其在多重检测中的应用。

技术介绍

1、荧光定量pcr是临床基因点突变检测的重要方式，而arms(amplificationrefractory mutation system，即扩增受阻突变系统)荧光pcr，是其中一种新兴的荧光pcr检测技术。具体而言，arms荧光pcr检测的基本原理，是对待检测的突变位点设计一条特异性arms引物，该引物3’端最后碱基与野生型或突变型碱基相同，前2-5个碱基人为引入错配，提高末端碱基的结合特异性。同时在arms引物下游设计释放荧光的分子信标或taqman探针，以及另一方向的普通引物。在pcr反应过程中，由于taq dna聚合酶缺少3’→5’外切酶活性，若引物3’端形成错配，则错配碱基无法被水解，arms引物延伸反应受阻，在一定扩增循环内，不会检测出特异扩增产物和荧光信号；反之，3’端配对则arms引物和配对引物正常扩增，引物延伸过程中伴随分子信标结合或taqman探针水解释放的荧光信号逐渐放大，从而检测出扩增产物。arms荧光pcr由本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种改进的ARMS引物与Blocker组合体系，其特征在于，所述改进的ARMS引物与Blocker组合体系中将荧光集团标记的探针修饰在检测目的碱基的ARMS引物上，并在体系中引入覆盖探针结合序列的Blocker，抑制ARMS引物上的探针与靶向序列分子间的结合，ARMS引物上的探针与该ARMS引物延伸产物靶向序列优先形成分子内的结合，释放相应荧光信号。

2.根据权利要求1所述的一种改进的ARMS引物与Blocker组合体系，其特征在于，所述Blocker浓度为ARMS引物总浓度的10倍以上。

3.根据权利要求2所述的一种改进的ARMS引物与Blocker组合体系...

【技术特征摘要】

1.一种改进的arms引物与blocker组合体系，其特征在于，所述改进的arms引物与blocker组合体系中将荧光集团标记的探针修饰在检测目的碱基的arms引物上，并在体系中引入覆盖探针结合序列的blocker，抑制arms引物上的探针与靶向序列分子间的结合，arms引物上的探针与该arms引物延伸产物靶向序列优先形成分子内的结合，释放相应荧光信号。

2.根据权利要求1所述的一种改进的arms引物与blocker组合体系，其特征在于，所述blocker浓度为arms引物总浓度的10倍以上。

3.根据权利要求2所述的一种改进的arms引物与blocker组合体系，其特征在于，所述blocker，序列长度为15-40个碱基，3’末端进行修饰，blocker序列完全覆盖探针结合序列，并在两侧有2-10碱基延长，使其tm值比探针序列高3-8℃。

4.根据权利要求1所述的一种改进的arms引物与blocker组合体系，其特征在于，所述反应体系中还包括反向通用引物序列，其长度为15-40个碱基，和待测序列的另一条链互补。

5.根据权利要求1所述的一种改进的arms引物与blocker组合体系，其特征在于，所述arms引物为蝎形结构，蝎形结构arms引物包括：(a)arms引物：序列长度为15-40个碱基，3’末端第1个碱基为突变位置，3’末端第2-5碱基引入0-3个错配，其余碱基与待测位点序列互补；...

【专利技术属性】
技术研发人员：李良鉴，濮悦，白雪霞，郑祥，
申请(专利权)人：杭州瑞普基因科技有限公司，
类型：发明
国别省市：