一种用于高通量筛选的无宿主背景干扰的植物内生细菌分离保藏方法技术

本发明专利技术公开了一种用于高通量筛选的无宿主背景干扰的植物内生细菌分离保藏方法，包含以下步骤：S1、植物预处理；S2、内生细菌培养物的获得；S3、确定内生细菌培养物的最佳培养浓度；S4、内生菌的分离培养；S5、内生菌筛选；S6.植物内生细菌16S全长基因扩增子纯化回收；S7.基于Nanopore平台的高通量测序及生物信息保藏。本发明专利技术的有益效果为：采用高通量培养法结合三代全长高通量测序技术进行植物内生细菌的快速鉴定，相较于现有的非培养方法可在测序完成后进行内生菌的保存，检测结果更完整；提供一种新的植物可培养内生细菌鉴定保藏方法，可有针对性的选择性培养植物内生细菌，极大提高植物内生菌的筛选及保藏效率。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物保藏，尤其是一种用于高通量筛选的无宿主背景干扰的植物内生细菌分离保藏方法。

技术介绍

1、植物细菌性病害可通过根际土壤或风雨条件下由表皮侵入寄主，也会通过伤口等侵入，致病细菌可残留于病残体、种子、土壤等越冬，遇适宜条件便可危害寄主。

2、现有细菌性病害的检测方法主要包括洗涤镜检、保湿培养、致病性测定和pcr检测等方法。这些方法虽然可对病原微生物进行定性检测，但受到技术自身的限制，传统方法并不能一次性检测出复杂样本中所有病原微生物，且不能进行高通量的筛选及菌种保存。因此，为了进行病原微生物的早期预防和全面筛查，植物内生微生物高通量检测及筛选保存技术近几年被广泛应用在植物病害检测等领域，其具有快速、可靠、分辨率高、重复性好等优点，这对于植物病害的研究提供了可重复的定量研究方法。通过高通量测序的方法，我们可对植物内生细菌的相互作用进行全面的研究。植物内生细菌是植物微生态系统中的重要组成部分，在长期协同进化过程中其与植物形成了相互依存等的关系，其产生的活性物质在植物抗病等产领域有着巨大的应用前景。但是由于植物叶绿体及线粒体与内生细菌基本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种用于高通量筛选的无宿主背景干扰的植物内生细菌分离保藏方法，其特征在于，它包含以下步骤：

2.根据要求要求1所述的一种用于高通量筛选的无宿主背景干扰的植物内生细菌分离保藏方法，其特征在于，所述消毒剂为有效氯浓度5％的次氯酸钠溶液。

3.根据要求要求1所述的一种用于高通量筛选的无宿主背景干扰的植物内生细菌分离保藏方法，其特征在于，所述步骤S2中梯度稀释采用10％TSB培养基对所述样本I进行200倍、600倍、2000倍、6000倍、18000倍、54000倍梯度稀释。

4.根据要求要求3所述的一种用于高通量筛选的无宿主背景干扰的植物内生细菌分离保藏...

【技术特征摘要】

1.一种用于高通量筛选的无宿主背景干扰的植物内生细菌分离保藏方法，其特征在于，它包含以下步骤：

2.根据要求要求1所述的一种用于高通量筛选的无宿主背景干扰的植物内生细菌分离保藏方法，其特征在于，所述消毒剂为有效氯浓度5％的次氯酸钠溶液。

3.根据要求要求1所述的一种用于高通量筛选的无宿主背景干扰的植物内生细菌分离保藏方法，其特征在于，所述步骤s2中梯度稀释采用10％tsb培养基对所述样本i进行200倍、600倍、2000倍、6000倍、18000倍、54000倍梯度稀释。

4.根据要求要求3所述的一种用于高通量筛选的无宿主背景干扰的植物内生细菌分离保藏方法，其特征在于，所述10％tsb培养基中包含三嗪类、咪唑啉酮类、苯基脲类、二苯醚类化合物中的一种或多种。

5.根据要求要求1所述的一种用于高通量筛选的无宿主背景干扰的植物内生细菌分离保藏方法，其特征在于，所述无菌多孔培养板为96孔培养板，无菌多孔培养板每孔加入体积为160μl。

6.根据要求要求1所述的一种用于高通量筛选的无宿主背景干扰的植物内生细菌分离保藏方法，其特征在于，所述步骤...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈玲，向娟，孙梓健，刘孝伟，罗小波，赵超，
申请(专利权)人：成都市农林科学院，
类型：发明
国别省市：