拟孢囊菌来源的胆固醇氧化酶、其突变体、其表达方法及在杀虫中的应用技术

本发明专利技术公开了拟孢囊菌来源的胆固醇氧化酶、其突变体、其表达方法及在杀虫中的应用。本发明专利技术从拟孢囊菌中分离克隆了胆固醇氧化酶基因并采用定向突变的方式对胆固醇氧化酶基因进行了突变获得了突变体，其中，胆固醇氧化酶的氨基酸序列为SEQ ID NO.1，其突变体的氨基酸序列为SEQ ID NO.3所示。本发明专利技术进一步将胆固醇氧化酶基因或其突变体基因通过原核或真核表达的方法进行了异源表达，并对有关诱导条件进行优化有效提高其表达水平。杀虫活性试验结果表明，本发明专利技术提供的胆固醇氧化酶或其突变体对双斑萤叶甲、黄粉虫成虫具有极强的杀虫活性，24小时致死率达90%，48小时致死率100%，对28星瓢虫具有一定的杀虫作用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及胆固醇氧化酶及其应用，尤其涉及来源拟孢囊菌的胆固醇氧化酶、突变体及其表达方法和在杀虫、血浆总胆固醇含量的检测中的应用，属于胆固醇氧化酶及其应用领域。

技术介绍

1、胆固醇氧化酶（cholesterol oxidase，cod）是一种黄素蛋白氧化还原酶，通过脱氢和异构化两步反应将胆固醇分解为过氧化氢和胆甾-4-烯-3-醇。临床上与胆固醇脂酶和过氧化氢酶一起作为血浆总胆固醇含量的检测试剂，用以诊断冠心病、动脉粥样硬化等心脑血管疾病（fazio s, f. linton m. proprotein convertase subtilisin/kexin type9 as transducer ofphysiologic influences on cellular cholesterol[j]. journalof the americancollege of cardiology, 2012, 59(19)）。

2、胆固醇氧化酶除了在医疗领域发挥重要作用外，也在抗虫方面具有一定的作用。早期研究表明胆固醇氧化酶能够杀死棉铃象甲幼虫，并能本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.拟孢囊菌来源的胆固醇氧化酶的突变体，其特征在于，所述突变体的氨基酸序列为SEQ ID NO.3所示。

2.权利要求1所述的突变体的编码基因，其特征在于，所述编码基因的核苷酸序列为SEQ ID NO.4所示。

3.含有权利要求2所述的编码基因的表达盒。

4.含有权利要求2所述的编码基因的重组表达载体，其中，所述的重组表达载体为重组酵母表达载体。

5.含有权利要求4所述的重组表达载体的重组宿主细胞；其中，所述的重组宿主细胞为重组酵母宿主细胞。

6.制备权利要求1所述的突变体的方法，其特征在于，包括：将拟孢囊菌来源的胆固醇氧化酶的...

【技术特征摘要】

1.拟孢囊菌来源的胆固醇氧化酶的突变体，其特征在于，所述突变体的氨基酸序列为seq id no.3所示。

2.权利要求1所述的突变体的编码基因，其特征在于，所述编码基因的核苷酸序列为seq id no.4所示。

3.含有权利要求2所述的编码基因的表达盒。

4.含有权利要求2所述的编码基因的重组表达载体，其中，所述的重组表达载体为重组酵母表达载体。

5.含有权利要求4所述的重组表达载体的重组宿主细胞；其中，所述的重组宿主细胞为重组酵母宿主细胞。

6.制备权利要求1所述的突变体的方法，其特征在于，包括：将拟孢囊菌来源的胆固醇氧化酶的突变体的编码基因可操作的与表达调控元件相连接得到重组表达载体；将该重组表达载体转化宿主细胞得到重组宿主细胞；诱导重组宿主细胞中的胆固醇氧化酶的突变体进行表达，将表达的重组蛋白进行复性、纯化，即得。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙文丽，匡悦，崔浩然，
申请(专利权)人：中国农业科学院生物技术研究所，
类型：发明
国别省市：