喜树中CYP81选择性羟化酶基因、载体、微粒体蛋白以及应用制造技术

本发明专利技术提供了喜树中CYP81选择性羟化酶基因、载体、微粒体蛋白以及应用，属于生物工程技术领域。本发明专利技术喜树中的CYP81选择性羟化酶基因，包括CYP81B256基因、CYP81BQ18基因或CYP81BN24基因。CYP81B256和CYP81BQ18编码的蛋白可作为生物催化剂，用于CPT的C‑10位的选择性羟化，以制备10‑羟基喜树碱(10HCPT)；CYP81B256和CYP81BN24编码的蛋白可作为生物催化剂，用于槲皮素的C‑5’位的选择性羟化，以制备杨梅素。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物工程，尤其涉及喜树中cyp81选择性羟化酶基因、载体、微粒体蛋白以及应用。

技术介绍

1、两种喜树碱(cpt)类药物，拓扑替康和伊立替康，在临床上被用作抗肿瘤药物。它们呈现优良的dna拓扑异构酶i抑制活性，由此成为了一线抗癌药物之一。目前以10-羟基喜树碱(10hcpt)为原料，通过化学半合成的方法可以实现拓扑替康和伊立替康的商业化生产。因此，cpt类抗癌药物的生产会受到10hcpt产量的限制。研究发现10hcpt主要在喜树的果实和花中富集，但是其含量低，无法满足市场需求。yao课题组开发了两条10hcpt的简洁化学合成路线，总收率在10～14％，但其成本高不利于规模化生产。此外，研究人员也通过构建喜树愈伤组织和毛状根、分离内生菌等方式来制备10hcpt，但由于遗传不稳定性导致产量不稳定。由此人们把研究目光聚焦于解析10hcpt生物合成途径以及从来源植物中发掘参与10hcpt合成的功能酶元件。目前关于环烯醚萜前体生物合成的酶元件已几乎全部被发掘与表征，但是由于cpt复杂的结构特征以及缺乏参考基因，涉及下游途径的步骤以及最后c-10位羟化步本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.喜树中CYP81选择性羟化酶基因，其特征在于，包括CYP81B256基因、CYP81BQ18基因或CYP81BN24基因；

2.权利要求1所述CYP81选择性羟化酶基因编码的微粒体蛋白，其特征在于，包括CYP81B256微粒体蛋白、CYP81BQ18微粒体蛋白或CYP81BN24微粒体蛋白；

3.权利要求2所述CYP81选择性羟化酶基因编码的微粒体蛋白在作为羟基化催化剂中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，当所述微粒体蛋白为CYP81B256微粒体蛋白时，用于催化喜树碱羟基化，生成10-羟基喜树碱；或，用于催化槲皮素羟基化，生成杨梅...

【技术特征摘要】

1.喜树中cyp81选择性羟化酶基因，其特征在于，包括cyp81b256基因、cyp81bq18基因或cyp81bn24基因；

2.权利要求1所述cyp81选择性羟化酶基因编码的微粒体蛋白，其特征在于，包括cyp81b256微粒体蛋白、cyp81bq18微粒体蛋白或cyp81bn24微粒体蛋白；

3.权利要求2所述cyp81选择性羟化酶基因编码的微粒体蛋白在作为羟基化催化剂中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，当所述微粒体蛋白为cyp81b256微粒体蛋白时，用于催化喜树碱羟基化，生成10-羟基喜树碱；或，用于催化槲皮素羟基化，生成杨梅素；

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述羟基化的反应过程为：在含有底物和nadph的缓冲液中，添加所述微粒体蛋白，进行反应。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，当所述微粒体蛋白为...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒲祥，雷明，张家华，何金蔚，艾志辉，刘渝钶，何小雪，孙萌萌，杨胜男，王位，王晗光，黄乾明，
申请(专利权)人：四川农业大学，
类型：发明
国别省市：