一种用于构建高效评估DNA甲基化修饰细胞株模型的载体制造技术

本发明专利技术公开了一种用于构建高效评估DNA甲基化修饰细胞株模型的载体，该载体包括复制缺陷型慢病毒载体骨架、靶基因启动子区DNA序列、DNA甲基化敏感性启动子和荧光蛋白；靶基因启动子区DNA序列设置于复制缺陷型慢病毒骨架上，DNA甲基化敏感性启动子和荧光蛋白，位于靶基因启动子区DNA序列下游。本发明专利技术通过将该慢病毒载体包装病毒后感染细胞株，经过筛选与鉴定，得到用于高效评估DNA甲基化修饰的细胞株。当使用DNA甲基化编辑工具对靶基因进行DNA甲基化或去甲基化编辑时，无需甲基化测序或RNA‑seq等繁琐步骤，可直接通过荧光显微镜或流式细胞术分析荧光蛋白的表达变化。成本低且不需要配套检测试剂盒；该细胞株模型对甲基化状态反应灵敏、稳定性、重复性好。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及dna甲基化修饰检测，尤其涉及一种用于构建高效评估dna甲基化修饰细胞株模型的慢病毒载体与应用。

技术介绍

1、dna甲基化修饰是发生在dna水平的表观遗传修饰，是调控、维持细胞分化和发育过程中基因表达水平的重要途径，对哺乳动物细胞发育和功能调节至关重要。异常的dna甲基化修饰与某些疾病、癌症的发生密切相关，dna甲基化编辑系统和去甲基化编辑系统为基于包括crispr、talens、zfns的dna靶向系统融合dnmt3a-dnmt3l的甲基化修饰酶或包括tet的去甲基化酶的甲基化编辑或去甲基化编辑系统。dna甲基化作为潜在的疾病诊断和治疗靶点，已成为疾病研究的热点之一。

2、大量临床前研究发现，抑癌基因启动子区域cpg岛高甲基化是许多肿瘤发生的早期重要事件，如肾癌vhl基因、黑色素瘤p16基因、直肠癌apc基因等。甲基转移酶抑制剂能有效抑制dnmt酶活性，从而抑制dna甲基化修饰，在许多中抗癌治疗中被广泛研究。

3、基因治疗方面的研究进展表明,甲基化系统dcas9-dnmt和去甲基化系统dcas9-tet能在表观遗传本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种用于构建高效评估DNA甲基化修饰细胞株模型的载体，其特征在于，包括复制缺陷型慢病毒载体骨架、靶基因启动子区DNA序列、DNA甲基化敏感性启动子和荧光蛋白；

2.根据权利要求1所述的用于构建高效评估DNA甲基化修饰细胞株模型的载体，其特征在于，所述的复制缺陷型慢病毒载体骨架为自主灭活型慢病毒载体；

3.根据权利要求2所述的用于构建高效评估DNA甲基化修饰细胞株模型的载体，其特征在于，通过如下步骤制备得到：以序列如SEQ ID NO.1所示的复制缺陷型慢病毒载体pLenti-copEGFP为骨架，将靶基因启动子区DNA序列和甲基化敏感启动子构建到复制缺陷型慢病...

【技术特征摘要】

1.一种用于构建高效评估dna甲基化修饰细胞株模型的载体，其特征在于，包括复制缺陷型慢病毒载体骨架、靶基因启动子区dna序列、dna甲基化敏感性启动子和荧光蛋白；

2.根据权利要求1所述的用于构建高效评估dna甲基化修饰细胞株模型的载体，其特征在于，所述的复制缺陷型慢病毒载体骨架为自主灭活型慢病毒载体；

3.根据权利要求2所述的用于构建高效评估dna甲基化修饰细胞株模型的载体，其特征在于，通过如下步骤制备得到：以序列如seq id no.1所示的复制缺陷型慢病毒载体plenti-copegfp为骨架，将靶基因启动子区dna序列和甲基化敏感启动子构建到复制缺陷型慢病毒载体plenti-copegfp的copegfp基因的上游，构建高效评估dna甲基化修饰细胞株模型的慢病毒载体。

4.根据权利要求1-3任一项所述的用于构建高效评估dna甲基化修饰细胞株模...

【专利技术属性】
技术研发人员：汪微，张英杰，袁慧军，
申请(专利权)人：四川大学华西医院，
类型：发明
国别省市：