一种提高基因表达的奶山羊乳腺特异性增强子及表达载体制造技术

本发明专利技术涉及基因表达与调控技术领域，公开了一种提高基因表达的奶山羊乳腺特异性增强子及表达载体，首先利用NCBI检索奶山羊四种酪蛋白基因序列，检测奶山羊四种酪蛋白转录结合因子的潜在信号。挖掘及鉴定出奶山羊泌乳期特异性增强酪蛋白基因表达的关键基序，为解决奶山羊乳腺生物反应器外源基因表达低的难题提供天然调控元件，通过筛选出奶山羊泌乳期能特异性提高内源性酪蛋白基因表达的5个超级增强子序列，并在细胞水平上验证了序列的有效性和安全性，是来自于奶山羊的天然基序及调控序列，解决了现有奶山羊乳腺生物反应器缺乏专属于奶山羊泌乳期乳腺显著增强外源基因表达上调的内源性关键基序及调控序列致使外源基因表达水平低下的问题。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及基因表达与调控，具体为一种提高基因表达的奶山羊乳腺特异性增强子及表达载体。

技术介绍

1、奶山羊乳腺生物反应器对于大规模生产具有生物活性的重组蛋白具有独特优势与广阔应用前景。然而，外源基因整合效率低下且插入基因的表达易受附近染色质结构的影响，严重限制了该技术的研究推广。奶山羊泌乳期间酪蛋白作为乳汁表达量最高的乳蛋白成分(泌乳期较干奶期表达量上调近万倍)，因其特殊的紧密连锁排布基因座，常作为研究增强外源基因表达的首选内源性表达调控序列。将其核心启动子、特异性增强子及超级增强子调控元件与外源目的基因整合构建嵌合启动子，是目前在转录水平提高外源基因表达的重要手段；

2、通过生物信息学分析对小鼠泌乳期转录因子stat5、h3k27ac、h3k4me3的chip-seq数据(gse74826)与山羊基因组聚合。发现奶山羊四种酪蛋白基因座上存在5个明显的转录因子富集现象，考虑这些区域出现的转录因子peaks与奶山羊泌乳期调控内源性酪蛋白基因表达的特异性超级增强子位点有关联；

3、在奶山羊基因座中发现能在特定泌乳时期提高基因表达的内本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种提高基因表达的奶山羊乳腺特异性增强子，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种提高基因表达的奶山羊乳腺特异性增强子，其特征在于，所述步骤八中反应体系(50μL)：5×PrimeSTAR Buffer(Mg2+Plus)10μL、dNTP Mixture(2.5mM each)4μL、上下游引物(10～15pmol)各1μL、Template 1μL、PrimeSTAR HSDNAPolymerase(2.5U/μl)0.5μL、dd H2O 32.5μL。

3.根据权利要求2所述的一种提高基因表达的奶山羊乳腺特异性增强子，其特征在于，所述步...

【技术特征摘要】

1.一种提高基因表达的奶山羊乳腺特异性增强子，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种提高基因表达的奶山羊乳腺特异性增强子，其特征在于，所述步骤八中反应体系(50μl)：5×primestar buffer(mg2+plus)10μl、dntp mixture(2.5mm each)4μl、上下游引物(10～15pmol)各1μl、template 1μl、primestar hsdnapolymerase(2.5u/μl)0.5μl、dd h2o 32.5μl。

3.根据权利要求2所述的一种提高基因表达的奶山羊乳腺特异性增强子，其特征在于，所述步骤八中反应参数：98℃2min预变性；98℃20s变性，58～65℃34s退火，72℃延伸1min，40个循环；72℃延伸5min。

4.根据权利要求1所述的一种提高基因表达的奶山羊乳腺特异性增强子，其特征在于，所述步骤九前选择萤火虫荧光素酶报告载体pg...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘军，米晓钰，张涌，罗艳，祝振亮，赵江林，薛姣雄，高丹丹，
申请(专利权)人：西北农林科技大学，
类型：发明
国别省市：