一种基于RPA-CRISPR/Cas12a检测A型塞内卡病毒核酸可视化检测试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种基于RPA‑CRISPR/Cas12a检测猪A型塞内卡病毒的试剂盒及核酸检测模板的制备方法，通过样品预处理将采集自猪的生物检材制成用于SVA核酸检测的模板提取液，随后根据建立的免核酸提取SVA检测体系，通过RPA方法进行扩增，利用Cas12a和crRNA组装的复合物识别并结合RPA扩增的特异产物上的特定位点序列以激活Cas12a的附属切割活性，从而对ssDNA探针进行切割，最后在紫外灯下肉眼观察显色结果判定猪感染SVA的情况。本发明专利技术对SVA的检测操作简单，并且具有较高的灵敏度和特异性，为现场筛查提供了快速检测试剂。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物检测，是一种基于crispr/cas12a检测系统与rpa技术相结合实现sva可视化检测方法，涉及一种sva的扩增引物组、rpa扩增试剂盒和检测体系的建立。

技术介绍

1、a型塞内卡病毒(senecavirus a,sva)属于小核糖核酸病毒科塞内卡病毒属的唯一成员，是一种无包膜单股正链rna病毒，是引起猪塞内卡病毒病的主要病原。

2、猪塞内卡病毒病的主要发病特征为引起猪群鼻部、唇部、蹄部、腹部、背部等部位出现水泡、脓包、溃疡等病变，由于它的临床症状与口蹄疫、猪传染性水疱病、猪水疱性皮疹、猪水疱性口炎等疾病的临床症状极为相似，这给疾病的鉴别诊断造成了严重的困难，所以急需开发一种快速、准确的诊断方法，用于鉴别塞内卡病毒的感染、评估塞内卡病毒的传染性以及评价疫苗的免疫效果。

3、目前市面上存在许多检测sva感染的方法，包括pcr、血清中和试验、间接免疫荧光法(ifa)和竞争性酶联免疫吸附试验(竞争elisa)等。血清中和试验和间接免疫荧光法存在检测速度较慢、检测过程繁琐的问题。竞争elisa检测技术需要特异性较好的单克本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种基于RPA-CRISPR/Cas12a检测A型塞内卡病毒核酸可视化检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括免核酸提取试剂、SVA扩增引物组、RPA扩增试剂盒以及检测试剂盒反应液；其中

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的crRNA核苷酸序列P2的工作浓度为400～500nM。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述Cas12a蛋白工作浓度为250～300nM。

4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的RPA扩增试剂盒包括RPA反应单元冻干粉、RPA缓冲液和启动剂，其中RPA反应单元冻干粉包含重组酶蛋白Uvs x和...

【技术特征摘要】

1.一种基于rpa-crispr/cas12a检测a型塞内卡病毒核酸可视化检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括免核酸提取试剂、sva扩增引物组、rpa扩增试剂盒以及检测试剂盒反应液；其中

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的crrna核苷酸序列p2的工作浓度为400～500nm。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述cas12a蛋白工作浓度为250～300nm。

4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的rpa扩增试剂盒包括rpa反应单元冻干粉、rpa缓冲液和启动剂，其中rpa反应单元冻干粉包含重组酶蛋白uvs x和uvs y、单链结合蛋...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵晓民，童德文，高娟，舒金琪，查银河，常玲玲，
申请(专利权)人：西北农林科技大学，
类型：发明
国别省市：