一种短短芽孢杆菌工程菌株高密度发酵生产伊短菌素的方法技术

本发明专利技术涉及一种短短芽孢杆菌工程菌株高密度发酵生产伊短菌素的方法，属于微生物技术领域。所述方法是将保藏编号为CCTCC NO：M2019681的短短芽孢杆菌接种在高密度培养基上进行高密度发酵以产生伊短菌素；其中，所述高密度发酵培养基以磷酸氢二钾与磷酸氢二钠配制成的缓冲溶液为溶液，其中含有葡萄糖、蛋白胨、酪蛋白、七水硫酸镁和硫酸锰。本发明专利技术为了克服现有短短芽孢杆菌发酵菌体密度不高、伊短菌素产量低的缺点，能够大幅提高了菌体发酵密度和伊短菌素的产量，降低了生产应用成本，具有良好的应用价值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种短短芽孢杆菌工程菌株高密度发酵生产伊短菌素的方法，属于微生物。

技术介绍

1、短短芽孢杆菌广泛分布环境中，可合成并分泌多种抑菌活性物质，对革兰氏阳性细菌、革兰氏阴性细菌、支原体和真菌都有强烈抑制活性，在植物、动物等病害的生物防控中已有大量应用。

2、短短芽孢杆菌x23分离自烟草根际土壤，在nb和lb等培养基中可分泌伊短菌素。伊短菌素是一种非核糖体肽类抗生素，由1个苯丙氨酸或酪氨酸、1个异丝氨酸、1个二氨基丙酸、1个二氨基庚二酸、1个甘氨酸和c端的精胺或亚精胺组成，可抑制dna和蛋白质合成，具有广谱的抑菌活性。野生型菌株合成伊短菌素的效率低下，前期通过启动子工程，将短短芽孢杆菌x23中edeine生物合成基因簇(biosynthesis gene cluster of edeine,ede bgc)的启动子替换为组成型表达启动子pmwp，获得了高产伊短菌素的工程菌株x23(pede::pmwp)，工程菌株在nb培养基中的产量增幅是野生型菌株x23的8.64倍，达83.6mg/l(论文于2022年发表在国际期刊microbial 本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种发酵生产伊短菌素的方法，其特征在于，将保藏编号为CCTCC NO:M2019681的短短芽孢杆菌接种在高密度培养基上进行高密度发酵以产生伊短菌素；其中，所述高密度发酵培养基以磷酸氢二钾与磷酸氢二钠配制成的缓冲溶液为溶液，其中含有葡萄糖、蛋白胨、酪蛋白、七水硫酸镁和硫酸锰。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述高密度发酵培养基配方为：磷酸氢二钾与磷酸氢二钠配制成的缓冲溶液中，葡萄糖0.8-1.2%、蛋白胨2-4%、酪蛋白0.4-0.8%、七水硫酸镁0.005-0.015%、硫酸锰0.003-0.008%，pH 7.0-7.4；优选地，所述高密度发酵培养基配方为：...

【技术特征摘要】

1.一种发酵生产伊短菌素的方法，其特征在于，将保藏编号为cctcc no:m2019681的短短芽孢杆菌接种在高密度培养基上进行高密度发酵以产生伊短菌素；其中，所述高密度发酵培养基以磷酸氢二钾与磷酸氢二钠配制成的缓冲溶液为溶液，其中含有葡萄糖、蛋白胨、酪蛋白、七水硫酸镁和硫酸锰。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述高密度发酵培养基配方为：磷酸氢二钾与磷酸氢二钠配制成的缓冲溶液中，葡萄糖0.8-1.2%、蛋白胨2-4%、酪蛋白0.4-0.8%、七水硫酸镁0.005-0.015%、硫酸锰0.003-0.008%，ph 7.0-7.4；优选地，所述高密度发酵培养基配方为：磷酸氢二钾与磷酸氢二钠配制成的缓冲溶液中，葡萄糖1%、蛋白胨3%、酪蛋白0.6%、七水硫酸镁0.01%、硫酸锰0.005%，ph 7.2。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，补料策略为ph恒定、碳源分批减量流加，所述碳源为葡萄糖；更具体地，碳源分批减量添加的策略为12h、24h、36h和48h分别添加9g/l、7g/l、3g/l和2g/l。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，高密度发酵条件为：28-32℃，设定溶氧量不低于20%，搅拌速度在200~315 rpm间自动调整，通气量在1.0~12.8 l/min...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈武，刘清术，谭石勇，郭照辉，王运生，李魏，邱尧，文亚雄，
申请(专利权)人：湖南农业大学，
类型：发明
国别省市：