高麦角甾醇含量米曲霉菌株及构建方法技术

本发明专利技术提供一种高麦角甾醇含量米曲霉菌株及构建方法，以农杆菌介导转基因技术、基因过表达和组合共过表达策略实现；其主要包含以下步骤：以酵母麦角甾醇合成通路基因为参考序列，鉴定出米曲霉中麦角甾醇生物合成相关基因；分别构建米曲霉麦角甾醇生物合成相关基因的过表达载体；将过表达载体转入农杆菌中，进而转入米曲霉中，成功获得过表达株系；测定获得的米曲霉麦角甾醇合成酶过表达株系的麦角甾醇含量，并进行分析发现AoHmg过表达菌株麦角甾醇含量增加最多；将过表达可以提高麦角甾醇含量的基因组合共同过表达来提高麦角甾醇含量。本发明专利技术所制备的米曲霉菌株具备高含量麦角甾醇的特点，以补充目前麦角甾醇产量不足的问题。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及基因工程，特别涉及高麦角甾醇含量米曲霉菌株及构建方法。

技术介绍

1、米曲霉作为食品安全级的真菌在不仅在传统食品发酵、调味品和酿造等行业中具有十分悠久的应用历史，而且在现代生物技术产业比如酶制剂和重组蛋白的生产等方面的应用也日益广泛。

2、麦角甾醇又称为麦角固醇，是主要存在于真菌的甾醇类。麦角甾醇是细胞膜的主要组成成分，参与调控细胞膜的流动性、通透性与物质运输。因此，麦角甾醇对调节真菌的生长和繁殖是必不可少的。此外，麦角甾醇是维生素d2、甾体类药物和一些新型抗肿瘤、抗癌症、抗炎症病药物的前体，具有十分重要的经济价值。

3、近年来对麦角甾醇的研究逐步加深，发现麦角甾醇具有巨大经济价值，导致麦角甾醇所需量大幅度增加。工业生产麦角甾醇多集中于酵母发酵获取。为获取更高产量的麦角甾醇，许多学者对整个过程进行优化如，酵母菌种选育、优化工业发酵条件及提取工艺。然而，目前麦角甾醇仍无法满足正常需求。通过对米曲霉麦角甾醇合成酶的研究，揭示米曲霉生物合成麦角甾醇的过程，同时获得高产麦角甾醇的米曲霉菌株，也为米曲霉开拓了工业应用领域。...

【技术保护点】

1.一种高麦角甾醇含量米曲霉菌株的构建方法，其特征在于，包括：

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，对各所述目标基因进行扩增，并将扩增后的目标基因与pEX2B载体连接构建成对应数量的带有目标基因的pEX2B载体的步骤包括：

3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，对各所述麦角甾醇合成酶过表达株系进行麦角甾醇含量测定的步骤包括：

4.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，基于含量测定结果筛选出多个特征基因的过表达菌株的步骤包括：

5.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于，对各所述特征基因进行扩增，并将扩增后的特征基因与...

【技术特征摘要】

1.一种高麦角甾醇含量米曲霉菌株的构建方法，其特征在于，包括：

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，对各所述目标基因进行扩增，并将扩增后的目标基因与pex2b载体连接构建成对应数量的带有目标基因的pex2b载体的步骤包括：

3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，对各所述麦角甾醇合成酶过表达株系进行麦角甾醇含量测定的步骤包括：

4.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，基于含量测定结果筛选出多个特征基因的过表达菌株的步骤包括：

5.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于，对各所述特征基因进行扩增，并将扩增后的特征基因与pex2...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡志宏，秦坤海，姚丽华，张哲，田学琴，
申请(专利权)人：江西科技师范大学，
类型：发明
国别省市：