环状RNA组合物和方法技术

本文描述了环状RNA，以及相关的组合物和方法。在一些实施方案中，本发明专利技术的环状RNA包含I组内含子片段、间隔区、IRES、双链体形成区和表达序列。在一些实施方案中，所述表达序列编码抗原。在一些实施方案中，与线性RNA相比，本发明专利技术的环状RNA具有改进的表达、功能稳定性、免疫原性、制造容易性和/或半衰期。在一些实施方案中，与现有RNA环化方法相比，本发明专利技术的方法和构建体产生改进的环化效率、剪接效率和/或纯度。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】

技术介绍

1、常规基因疗法涉及使用dna来将所需遗传信息插入宿主细胞中。引入细胞中的dna通常在一定程度上整合至一个或多个转染细胞的基因组中，从而允许所引入的遗传物质在宿主中的长效作用。虽然这类持续作用可具有实质益处，但是外源性dna整合至宿主基因组中也可具有许多有害效应。举例来说，可能所引入的dna将插入完整基因中，导致阻碍或甚至完全消除内源性基因的功能的突变。因此，使用dna的基因疗法可导致损害所治疗宿主的重要遗传功能，如例如，消除或有害减少必需酶的产生或干扰对于细胞生长的调控起关键作用的基因，从而导致未经调控的或癌性的细胞增殖。另外，使用常规基于dna的基因疗法，为了有效表达所需基因产物，必需包括强启动子序列，这也可导致细胞中的正常基因表达的调控的不良变化。也可能基于dna的遗传物质将导致诱导不需要的抗dna抗体，其进而可触发可能致命的免疫应答。使用病毒载体的基因治疗方法也可导致不良免疫应答。在一些情况下，病毒载体甚至可整合至宿主基因组中。另外，临床级病毒载体的生产也昂贵并且费时。所引入的遗传物质使用病毒载体的靶向递送还可能难以控制。因此，虽然已经本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种前体RNA多核苷酸，其按以下顺序包含，

2.一种前体RNA多核苷酸，其按以下顺序包含，

3.一种前体RNA多核苷酸，其按以下顺序包含，

4.如权利要求1或2所述的前体RNA多核苷酸，其中所述TIE包含非翻译区(UTR)或其片段、适体复合物或其片段或它们的组合。

5.如权利要求4所述的前体RNA多核苷酸，其中所述UTR或其片段来源于病毒或真核信使RNA。

6.如权利要求5所述的前体RNA多核苷酸，其中所述UTR或其片段包含病毒内部核糖体进入位点(IRES)或真核IRES。

7.如权利要求1或2所述的前体RNA多...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

1.一种前体rna多核苷酸，其按以下顺序包含，

2.一种前体rna多核苷酸，其按以下顺序包含，

3.一种前体rna多核苷酸，其按以下顺序包含，

4.如权利要求1或2所述的前体rna多核苷酸，其中所述tie包含非翻译区(utr)或其片段、适体复合物或其片段或它们的组合。

5.如权利要求4所述的前体rna多核苷酸，其中所述utr或其片段来源于病毒或真核信使rna。

6.如权利要求5所述的前体rna多核苷酸，其中所述utr或其片段包含病毒内部核糖体进入位点(ires)或真核ires。

7.如权利要求1或2所述的前体rna多核苷酸，其中所述核心功能元件包含两个或更多个内部核糖体进入位点(ires)。

8.如权利要求7所述的前体rna多核苷酸，其中所述核心功能元件包含tie、编码元件、终止序列、任选的间隔区、tie、编码元件和终止序列，其中所述tie包含ires。

9.如权利要求6-8中任一项所述的前体rna多核苷酸，其中所述ires包含选自seq idno：1-2983和3282-3287的序列或其片段。

10.如权利要求6-9中任一项所述的前体rna多核苷酸，其中所述ires包含选自seq idno：75、77、137、532、566、582、648、680、693、752、785、787、791、793、820、823、839、840、843、852、857、861、862、863、864、871、874、876、922、959、983、984、1015、1017、1023、1026、1031、1041、1047、1059、1068、1134、1168、1169、1171、1177、1178、1179、1180、1189、1192、1193、1198、1216、1218、1230、1263、1276、1280、1282、1284、1287、1346、1354、1364、1367、1370、1432、1438、1440、2285、2465、2601、2615、2616、2617、2618、2627、2667、2681、2742、2746、2758、2777、2778、3282、3283、3286和3287的序列或其片段。

11.如权利要求6-8中任一项所述的前体rna多核苷酸，其中与野生型病毒ires或真核ires相比，所述ires包含一个或多个经修饰的核苷酸。

12.如权利要求6-11中任一项所述的前体rna多核苷酸，其中所述ires能够促进由前体rna编码的蛋白质在细胞中的表达。

13.如权利要求12中任一项所述的前体rna多核苷酸，其中所述ires能够促进所述蛋白质的表达，使得所述蛋白质的表达水平与使用对照ires时相当或更高。

14.如权利要求13所述的前体rna多核苷酸，其中所述对照ires包含seq id no：3282的序列。

15.如权利要求12-14中任一项所述的前体rna多核苷酸，其中所述ires来源于肠道病毒、嵴病毒、副肠孤病毒或心病毒。

16.如权利要求12-15中任一项所述的前体rna多核苷酸，其中所述ires来源于肠道病毒或嵴病毒。

17.如权利要求12-14中任一项所述的前体rna多核苷酸，其中所述细胞是肌管。

18.如权利要求17所述的前体rna多核苷酸，其中所述ires来源于bopivirus、梭状病毒、hunnivirus、passerivirus、mischivirus、嵴病毒、肠道病毒、心病毒、萨力病毒、rabovirus、副肠孤病毒、gallivirus或sicinivirus。

19.如权利要求17所述的前体rna多核苷酸，其中所述ires来源于hunnivirus、passerivirus、嵴病毒、bopivirus或肠道病毒。

20.如权利要求17所述的前体rna多核苷酸，其中所述ires来源于肠道病毒i、肠道病毒f、肠道病毒e、肠道病毒j、肠道病毒c、肠道病毒a、肠道病毒b、爱知病毒b、副肠孤病毒a、心病毒f、心病毒b或心病毒e。

21.如权利要求17所述的前体rna多核苷酸，其中所述ires包含选自seq id no：137、580、785、791、820、922、1041、1047、1068、1168、1169、1171、1177、1178、1179、1180、1189、1192、1263、1276、1280、1282、1284、1287、1354、1356、1432、1436、1439、1440、2285、2667、2746、2777、2778、3283和3284的序列。

22.如权利要求12-14中任一项所述的前体rna多核苷酸，其中所述细胞是肝细胞。

23.如权利要求22所述的前体rna多核苷酸，其中所述ires来源于肠道病毒、bopivirus、mischivirus、gallivirus、梭状病毒、心病毒、嵴病毒、rabovirus、萨力病毒、副肠孤病毒、hunnivirus、鸟取病毒、passerivirus、寇沙病毒或sicinivirus。

24.如权利要求23所述的前体rna多核苷酸，其中所述ires来源于肠道病毒、mischivirus、嵴病毒、bopivirus或gallivirus。

25.如权利要求23所述的前体rna多核苷酸，其中所述ires来源于肠道病毒b、肠道病毒a、肠道病毒d、肠道病毒h、肠道病毒c、鼻病毒b、肠道病毒h、肠道病毒i、肠道病毒e、肠道病毒f、爱知病毒b、爱知病毒a、副肠孤病毒a、心病毒f、心病毒e或心病毒b。

26.如权利要求22所述的前体rna多核苷酸，其中所述ires包含选自seq id no：137、580、648、693、752、785、791、793、820、823、839、840、861、862、863、876、922、959、983、984、1015、1017、1023、1026、1031、1041、1047、1059、1068、1134、1168、1169、1171、1177、1178、1179、1180、1189、1192、1193、1198、1216、1263、1276、1280、1282、1284、1287、1346、1354、1356、1432、1436、1438、1439、1440、2285、2777、2778、3283和3284的序列。

27.如权利要求12-14中任一项所述的前体rna多核苷酸，其中所述细胞是t细胞。

28.如权利要求27所述的前体rna多核苷酸，其中所述ires来源于passerivirus、bopivirus、hunnivirus、mischivirus、肠道病毒、嵴病毒、rabovirus、鸟取病毒、萨力病毒、心病毒、副肠孤病毒、megrivirus、allexivirus、梭状病毒或shanbavirus。

29.如权利要求28所述的前体rna多核苷酸，其中所述ires来源于passerivirus、hunnivirus、mischivirus、肠道病毒或嵴病毒。

30.如权利要求28所述的前体rna多核苷酸，其中所述ires来源于肠道病毒i、肠道病毒d、肠道病毒c、肠道病毒a、肠道病毒j、肠道病毒h、爱知病毒b、副肠孤病毒a或心病毒b。

31.如权利要求27所述的前体rna多核苷酸，其中所述ires包含选自seq id no：77、787、793、820、839、840、843、852、857、861、862、863、864、871、874、876、959、1193、1216、1284、1287、1346、1356、1364、1432、1438、1440、2667、2681、2742、2746、2758、3283和3284的序列。

32.如权利要求4所述的前体rna多核苷酸，其中所述适体复合物或其片段包含天然或合成适体序列。

33.如权利要求4所述的前体rna多核苷酸，其中所述适体复合物或其片段包含选自seqid no：3266-3268的序列。

34.如权利要求4所述的前体rna多核苷酸，其中所述适体复合物或其片段包含多于一种适体。

35.如权利要求1或2所述的前体rna多核苷酸，其中所述tie包含utr和适体复合物。

36.如权利要求35所述的前体rna多核苷酸，其中所述utr位于所述适体复合物的上游。

37.如权利要求1或2所述的前体rna多核苷酸，其中所述tie还包含辅助元件。

38.如权利要求37所述的前体rna多核苷酸，其中所述辅助元件包含mirna结合位点或其片段、限制性位点或其片段、rna编辑基序或其片段、zip代码元件或其片段、rna运输元件或其片段或它们的组合。

39.如权利要求37所述的前体rna多核苷酸，其中所述辅助元件包含ire s反式作用因子(itaf)的结合结构域。

40.如权利要求39所述的前体rna多核苷酸，其中所述结合结构域包含多聚a区、多聚c区、多聚ac区、多聚嘧啶串，或它们的组合或变体。

41.如权利要求39所述的前体rna多核苷酸，其中所述itaf包含多聚(rc)结合蛋白1(pcbp1)、pcbp2、pcbp3、pcbp4、多聚(a)结合蛋白1(pabp1)、多聚嘧啶串结合蛋白(ptb)、argonaute蛋白家族成员、hnrnpk(异质核内核糖核蛋白k蛋白)或la蛋白，或它们的片段或组合。

42.如权利要求1或2所述的前体rna多核苷酸，其中所述编码元件包含编码治疗性蛋白质的序列。

43.如权利要求42所述的前体rna多核苷酸，其中所述治疗性蛋白质包含嵌合蛋白。

44.如权利要求43所述的前体rna多核苷酸，其中所述嵌合蛋白包含嵌合抗原受体(car)、t细胞受体(tcr)、b细胞受体(bcr)、免疫细胞活化或抑制性受体、重组融合蛋白、嵌合突变型蛋白或融合蛋白或它们的组合。

45.如权利要求42所述的前体rna多核苷酸，其中所述治疗性蛋白质包含抗体、纳米抗体、非抗体蛋白、免疫调节配体、受体、结构蛋白、生长因子配体或受体、激素或激素受体、转录因子、检查点抑制剂或激动剂、fc融合蛋白、抗凝剂、凝血因子、伴侣蛋白、抗微生物蛋白、结构蛋白、生化酶、紧密连接蛋白、线粒体应激反应、细胞骨架蛋白、金属结合蛋白或小分子。

46.如权利要求45所述的前体rna多核苷酸，其中所述免疫调节配体包含干扰素、细胞因子、趋化因子或白细胞介素。

47.如权利要求45所述的前体rna多核苷酸，其中所述结构蛋白是通道蛋白或核孔蛋白。

48.如权利要求3所述的前体rna多核苷酸，其中所述非编码元件包含多于一个非编码元件。

49.如权利要求3或48所述的前体rna多核苷酸，其中所述非编码元件包含50至15,000个核苷酸的长度。

50.如权利要求1或2中任一项所述的前体rna多核苷酸，其中所述核心功能元件包含终止序列。

51.如权利要求50所述的前体rna多核苷酸，其中所述终止序列位于所述3′增强型外显子元件的5′端。

52.如权利要求50所述的前体rna多核苷酸，其中所述终止序列是终止密码子。

53.如权利要求50所述的前体rna多核苷酸，其中所述终止序列是终止盒。

54.如权利要求53所述的前体rna多核苷酸，其中所述终止盒在一个或多个框架中包含一个或多个终止密码子。

55.如权利要求54所述的前体rna多核苷酸，其中每个框包含终止密码子。

56.如权利要求54所述的前体rna多核苷酸，其中每个框包含两个或更多个终止密码子。

57.如权利要求1-3中任一项所述的前体rna多核苷酸，其中所述5′增强型内含子元件包含3′内含子片段。

58.如权利要求57所述的前体rna多核苷酸，其中所述3′内含子片段还包含3’i组内含子剪接位点二核苷酸的第一个核苷酸或第一个核苷酸和第二个核苷酸。

59.如权利要求58所述的前体rna多核苷酸，其中所述3′内含子片段位于所述5′增强型内含子元件的3’端。

60.如权利要求58所述的前体rna多核苷酸，其中所述i组内含子包含源自细菌噬菌体、病毒载体、细胞器基因组、核rdna基因。

61.如权利要求60所述的前体rna多核苷酸，其中所述核rdna基因包含源自真菌、植物或藻类的核rdna基因或其片段。

62.如权利要求1-3中任一项所述的前体rna多核苷酸，其中所述5′增强型内含子元件包含位于所述5′端的前导非翻译序列。

63.如权利要求62所述的前体rna多核苷酸，其中所述前导非翻译序列包含间隔区。

64.如权利要求62所述的前体rna多核苷酸，其中所述前导非翻译序列包含转录起始位点的最后一个核苷酸。

65.如权利要求64所述的前体rna多核苷酸，其中所述前导非翻译序列包含1至100个额外核苷酸。

66.如权利要求1-3中任一项所述的前体rna多核苷酸，其中所述5′增强型内含子元件包含5′亲和序列。

67.如权利要求66所述的前体rna多核苷酸，其中所述5′亲和序列包含多聚a、多聚ac或多聚嘧啶序列。

68.如权利要求67所述的前体rna多核苷酸，其中所述5′亲和序列包含10至100个核苷酸。

69.如权利要求1-3或57-68中任一项所述的前体rna多核苷酸，其中所述5′增强型内含子元件包含5′外部间隔区序列。

70.如权利要求69所述的前体rna多核苷酸，其中所述5′外部间隔区序列位于所述5′亲和序列与所述3′内含子片段之间。

71.如权利要求69所述的前体rna多核苷酸，其中所述5′外部间隔区序列具有约6至60个核苷酸的长度。

72.如权利要求69所述的前体rna多核苷酸，其中所述5′外部间隔区序列包含选自seqid no：3094-3152的序列或由其组成。

73.如权利要求1-3中任一项所述的前体rna多核苷酸，其中所述5’增强型内含子元件按以下顺序包含：

74.如权利要求1-3中任一项所述的前体rna多核苷酸，其中所述5’增强型内含子元件按以下顺序包含

75.如权利要求1-3中任一项所述的前体rna多核苷酸，其中所述5’增强型内含子元件按以下顺序包含：

76.如权利要求1-3中任一项所述的前体rna多核苷酸，其中所述5’增强型内含子元件按以下顺序包含：

77.如权利要求1-3中任一项所述的前体rna多核苷酸，其中所述5′增强型外显子元件包含3’外显子片段。

78.如权利要求78所述的前体rna多核苷酸，其中所述3′外显子片段还包含3’i组内含子剪接位点二核苷酸的第二个核苷酸。

79.如权利要求78所述的前体rna多核苷酸，其中所述3′外显子片段包含源自天然外显子的1至100个天然核苷酸。

80.如权利要求79所述的前体rna多核苷酸，其中所述天然外显子源自含有i组内含子的基因或其片段。

81.如权利要求79所述的前体rna多核苷酸，其中所述天然外显子来源于鱼腥藻属细菌、t4噬菌体病毒、twort噬菌体、四膜虫或固氮弧菌属细菌。

82.如权利要求1-3中任一项所述的前体rna多核苷酸，其中所述5′增强型外显子元件包含位于所述3′外显子片段下游的5′内部间隔区序列。

83.如权利要求82所述的前体rna多核苷酸，其中所述5′内部间隔区序列的长度是约6至60个核苷酸。

84.如权利要求83所述的前体rna多核苷酸，其中所述5’内部间隔区序列包含选自seqid no：3094-3152的序列或由其组成。

85.如权利要求1-3中任一项所述的前体rna多核苷酸，其中所述5’增强型外显子元件按以下顺序包含：

86.如权利要求1-3中任一项所述的前体rna多核苷酸，其中所述5’增强型外显子元件按以下顺序包含：

87.如权利要求1-3中任一项所述的前体rna多核苷酸，其中所述3′增强型外显子元件包含5’外显子片段。

88.如权利要求87所述的前体rna多核苷酸，其中所述5′外显子片段包含5’i组内含子片段的第一个核苷酸。

89.如权利要求87所述的前体rna多核苷酸，其中所述5′外显子片段还包含源自天然外显子的1至100个核苷酸。

90.如权利要求87所述的前体rna多核苷酸，其中所述天然外显子源自含有i组内含子的基因或其片段。

91.如权利要求1-3或87中任一项所述的前体rna多核苷酸，其中所述3′增强型外显子元件包含3’内部间隔区序列。

92.如权利要求91所述的前体rna多核苷酸，其中所述3’内部间隔区序列位于所述终止序列与所述5’外显子片段之间。

93.如权利要求91所述的前体rna多核苷酸，其中所述3′内部间隔区的长度是约6至60个核苷酸。

94.如权利要求91中任一项所述的前体rna多核苷酸，其中所述3’内部间隔区包含选自seq id no：3094-3152的序列或由其组成。

95.如权利要求1-3中任一项所述的前体rna多核苷酸，其中所述3′增强型外显子元件包含：

96.如权利要求1-3中任一项所述的前体rna多核苷酸，其中所述3′增强型外显子元件包含：

97.如权利要求1-3中任一项所述的前体rna多核苷酸，其中所述3′增强型内含子元件包含5′内含子片段。

98.如权利要求97所述的前体rna多核苷酸，其中所述5′内含子片段包含5’i组内含子剪接位点二核苷酸的第二个核苷酸。

99.如权利要求1-3或96-98中任一项所述的前体rna多核苷酸，其中所述3′增强型内含子元件包含位于所述5’内含子的3′端的尾随非翻译序列。

100.如权利要求99所述的前体rna多核苷酸，其中所述尾随非翻译序列包含3至12个核苷酸。

101.如权利要求1-3或96-100中任一项所述的前体rna多核苷酸，其中所述3′增强型内含子片段包含3′外部间隔区序列。

102.如权利要求101所述的前体rna多核苷酸，其中所述3′外部间隔区序列位于所述5’内含子片段与尾随非翻译序列之间。

103.如权利要求101所述的前体rna多核苷酸，其中所述3′外部间隔区序列具有约6至60个核苷酸的长度。

104.如权利要求101中任一项所述的前体rna多核苷酸，其中所述3′外部间隔区序列包含选自seq id no：3094-3152的序列或由其组成。

105.如权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：R·A·韦塞尔霍夫特，K·奥特，T·巴恩斯，G·莫兹，A·M·贝克，A·T·霍哈塔，B·古德曼，舒缓，V·席凡夏卡，
申请(专利权)人：欧纳医疗公司，
类型：发明
国别省市：