本发明专利技术涉及用于防除烟草青枯病的拮抗菌及其微生物有机肥料，属于农业集约化生产技术。本发明专利技术分离到了对烟草青枯病病原细菌有显著拮抗作用的两种拮抗菌（短短芽孢杆菌ＮＪＬ－２５和蜡状芽孢杆菌ＮＪＬ－１４），利用该拮抗菌与有机堆肥制成微生物有机肥料，肥料中分别含有１×１０１０个／ｇ以上的ＮＪＬ－２５和ＮＪＬ－１４、全氮含量为４～５％（９０％以上为有机氮），总氮磷钾养分为６～１０％、有机质含量为３０～３５％。试验表明，这种微生物有机肥料施入土壤后能够使拮抗菌迅速繁殖，在土壤中形成优势群，在已经有烟草青枯病的土壤中青枯病的生物防治率达９７．６％以上。在还没有形成连作障碍的土壤上长期施用本微生物有机肥料能在很大程度上防止连作烟草青枯病的发生。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及能防除连作烟草青枯病的拮抗菌及用其制成的微生物有机肥料，属于农业 集约化生产
，专用于克服和消除连作烟草青枯病问题。二
技术介绍
烟草是我国主要的经济作物，其质量的优劣关系着国计民生。烟草青枯病是烟草的主 要病害之一，危害严重，谓之烟癌。1880年首次发现于美国，目前，在我国西南烟区普 遍发生，在疫区常呈暴发流行，造成毁灭性损失，发病严重时产量损失80%左右。烟草青 枯病是一种发病严重的土传性细菌性病害，该病广泛分布于全世界的热带、亚热带和一些 温暖的地区。在中国，此病在河南、山东、江苏、云南、广西、河北、湖南、广东、福建 等地普遍发生，成为影响我国烟草产量及质量的罪魁祸首之一。烟草青枯病致病菌 (及too/ w/cetfmw)能通过土壤、流水(灌溉等)、种子等方式传播，对环境有很 强的适应能力。青枯菌侵染土壤初期，由于病原菌数量少，植株表现为生长受限，矮小， 畸形，易感病，农民往往认为是养分问题而加大氮肥投入，导致土壤中微生物群落进一步 失衡，病原菌在根际占据优势地位，烟草青枯病发生。在高温高湿的条件下，病害发展迅 速，发病严重的田块发病率达100%，造成绝收。另一方面，水稻、小麦、玉米、油菜等作物秸秆就地焚烧、规模化养殖后的畜禽粪便 随地弃置等不仅严重污染了环境，也极大地浪费了能作为有机肥和生物有机肥产品的原 料；大量的养分资源(C、 N、 P、 K、 S及微量元素)流失于土壤-植物系统之外，明显地 削弱了我国农业可持续发展的能力。如何将从土壤中因收获作物取走的营养元素最大限度 地归还到土壤中去，唯一的途径就是将这些固体有机废弃物制成商品有机肥，再施入土壤。 如果将这些固体有机废弃物经过高温发酵合成高品位的有机堆肥，再用于功能菌的载体， 所制成的微生物有机肥料功能明确，将会有很好的应用前景。三
技术实现思路
1. 技术问题本专利技术的目的在于研制一种能防除烟草青枯病的拮抗微生物有机肥料，防治效率达到 80%以上，使大量的连作障碍土壤得到生物修复，确保集约化农业的顺利发展。2. 技术方案用于防除连作烟草青枯病的拮抗菌，包括菌株N几-25和菌株NJL-14，其中，菌株N几-25属于短短芽孢杆菌(5rew'A3ciW^力reKJ、)， 2009年7月9日保藏于中国 微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCC NO. 3175，主要生物学 特性为革兰氏染色阳性G+,细胞形状为杆状，在膨大孢囊内含椭圆形芽孢，菌落平滑， 严格好氧生长，接触酶阴性、V.P.反应阴性，甲基红试验阴性，发酵蔗糖、果糖、甘露醇、 山梨醇等产酸不产气，硝酸还原酶阴性，淀粉水解阴性，明胶水解阳性，分解酪蛋白阳性， 不产生硫化氢，产生吲哚，最适生长温度3(TC，最适pH为7.0;菌株N几-14属于蜡状芽孢杆菌(勘ci77i/scerews)， 2009年7月10日保藏于中国微生 物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCC NO. 3174，主要生物学特性 为革兰氏染色阳性G+，细胞形状为杆状，孢囊无明显膨大，芽孢圆形或柱形，中生或近 中生。表面粗糙，扁平，不规则，兼性好氧生长，接触酶阳性、V.P.反应阳性，甲基红试 验阳性，发酵葡萄糖、蔗糖、果糖、麦芽糖、山梨醇等产酸不产气，硝酸还原酶阳性，淀 粉水解阳性，明胶水解阳性，分解酪蛋白阳性，不产生硫化氢和吲哚，最适生长温度30 。C，最适pH为7. 0。用上述拮抗菌所生产的防除连作烟草青枯病的微生物有机肥料，其特征在于该肥料 中分别含有lX10^个/g以上的拮抗菌N几-25和N几-14、全氮质量比含量为4 5% ，全氮 中质量比90%以上为有机氮，总氮磷钾养分质量比为6 10%、有机质质量比含量为30 35%。所述防除连作烟草青枯病的微生物有机肥料的生产方法，包括1)将菌株N几-25和菌株N几-14分别接种到PDA培养液，进行液体发酵生产，其 发酵生产的条件为初始pH范围为7.0-7.2，培养温度3(TC,溶氧通气量范围为30 100%， 170转/分钟，发酵中后期形成芽孢，发酵的拮抗菌液含菌或芽孢量》1X1(^个 /ml;所用PDA培养液配制方法为(以配置1L培养基为例)用200g土豆削皮后切成小块 放到水里煮，沸腾后煮30min，经过滤后滤液中加20 g普通蔗糖，定容至1000 ml， pH 值调至7.2-7.4， 12rC灭菌20min。2)将N几-25和N几-14液体菌剂按50 L/吨的量分别接种到腐熟的猪粪堆肥和菜粕微生 物酶解混合物中进行固体发酵，发酵温度为30-5(TC，发酵中每天翻堆l次，发酵5-7天后结 束，使拮抗菌含量达到lxl()8个/g以上，分别获得拮抗菌N几-25和N几-14的固体菌剂；所用 腐熟后的猪粪堆肥发芽指数为98%以上，有机质含量》35%，有机氮含量为1.2-2%，含水量 25—30%。53) 按堆肥和菜粕的微生物分解混合物两类分别将拮抗菌N几-25固体菌剂和N几-14固 体菌剂以体积比h l混合，获得堆肥的固体混合菌剂和菜粕微生物分解混合物的固体混合 菌剂。4) 再将堆肥的固体混合菌剂按体积比50-70%与菜粕微生物酶解混合物的固体混合菌 剂按体积比30-50%的比例充分混合，并后熟2-3天，后熟过程中翻堆2次，最后在温度不超 过60'C的条件下将微生物有机肥的含水量蒸发至30。/。以下，包装出厂即为防除连作烟草青 枯病的微生物有机肥料。所述微生物有机肥料可专用于防除连作烟草青枯病。3.有益效果本专利技术一种能克服或消除连作烟草青枯病的微生物有机肥料及其生产方法，利用猪粪 堆肥和菜粕的微生物酶解氨基酸混合物，再与拮抗菌液混合后制成微生物有机肥料，其产 品与目前市场上的产品相比具有如下优点1) 该肥料产品中含有两种抑制烟草青枯病病原细菌生长的专一性高效菌株(短短芽 孢杆菌和蜡状芽孢杆菌)，其抑制效果非常显著。试验结果表明，在连作烟草青枯病的土 壤上施用本产品后，烟草青枯病的生物防治率达80°/。以上，连续三年施用本肥料的土壤， 青枯病的生物防治率更髙。2) 该肥料为有机肥，含有丰富的有机质(含量30-35%)，有机氮含量为4%，而且大 部分为氨基酸和小分子多肽。本产品总磷含量为4%,而且生物有效性特别高，使用本产 品后能使作物顺利度过苗期磷素敏感期。相比之下，含磷化肥施入土壤后生物有效性较差。 有机肥料中含有的丰富营养也为其中的拮抗菌提供了生长繁殖的条件，使在土壤中存活下 来并形成优势群，从而发挥防病作用。3) 由于是生物菌株制剂，完全没有因化学农药的使用所带来的一系列问题，因而有 利于烟草的无公害生产，农民可以不用或减少其他防治青枯病化学农药的用量，这不仅可 为农民节省开支，而且有利于农产品的出口。同时，该微生物肥料还有增产功能，可为农 民增加收入。四附图说明图1:拮抗菌N几-25和N几-14的抑菌圈A: N几-25的抑菌圈 B: N几-14的抑菌圈图2:温室盆栽试验防治效果五具体实施方式 (一)菌株的分离和鉴定采集已经发生连作障碍并出现严重青枯病病症的植株和周围土壤，样品低温保存，采用Kelman's TTC Agar选择性培养基分离病原菌-茄劳尔氏菌(及/jtow》w/cean n)。然后以本文档来自技高网...
【技术保护点】
用于防除连作烟草青枯病的拮抗菌，包括菌株ＮＪＬ－２５和菌株ＮＪＬ－１４，其中， 菌株ＮＪＬ－２５属于短短芽孢杆菌（Ｂｒｅｖｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓ），２００９年７月９日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为ＣＧＭＣＣ ＮＯ．３１７５，主要生物学特性为：革兰氏染色阳性Ｇ＋，细胞形状为杆状，在膨大孢囊内含椭圆形芽孢，菌落平滑，严格好氧生长，接触酶阴性、Ｖ．Ｐ．反应阴性，甲基红试验阴性，发酵蔗糖、果糖、甘露醇、山梨醇等产酸不产气，硝酸还原酶阴性，淀粉水解阴性，明胶水解阳性，分解酪蛋白阳性，不产生硫化氢，产生吲哚，最适生长温度３０℃，最适ｐＨ为７．０； 菌株ＮＪＬ－１４属于蜡状芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ），２００９年７月１０日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为ＣＧＭＣＣ ＮＯ．３１７４，主要生物学特性为：革兰氏染色阳性Ｇ＋，细胞形状为杆状，孢囊无明显膨大，芽孢圆形或柱形，中生或近中生。表面粗糙，扁平，不规则，兼性好氧生长，接触酶阳性、Ｖ．Ｐ．反应阳性，甲基红试验阳性，发酵葡萄糖、蔗糖、果糖、麦芽糖、山梨醇等产酸不产气，硝酸还原酶阳性，淀粉水解阳性，明胶水解阳性，分解酪蛋白阳性，不产生硫化氢和吲哚，最适生长温度３０℃，最适ｐＨ为７．０。...
【技术特征摘要】
1、用于防除连作烟草青枯病的拮抗菌，包括菌株NJL-25和菌株NJL-14，其中，菌株NJL-25属于短短芽孢杆菌(Brevibacillus brevis)，2009年7月9日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCC NO.3175，主要生物学特性为革兰氏染色阳性G+，细胞形状为杆状，在膨大孢囊内含椭圆形芽孢，菌落平滑，严格好氧生长，接触酶阴性、V.P.反应阴性，甲基红试验阴性，发酵蔗糖、果糖、甘露醇、山梨醇等产酸不产气，硝酸还原酶阴性，淀粉水解阴性，明胶水解阳性，分解酪蛋白阳性，不产生硫化氢，产生吲哚，最适生长温度30℃，最适pH为7.0；菌株NJL-14属于蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)，2009年7月10日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCC NO.3174，主要生物学特性为革兰氏染色阳性G+，细胞形状为杆状，孢囊无明显膨大，芽孢圆形或柱形，中生或近中生。表面粗糙，扁平，不规则，兼性好氧生长，接触酶阳性、V.P.反应阳性，甲基红试验阳性，发酵葡萄糖、蔗糖、果糖、麦芽糖、山梨醇等产酸不产气，硝酸还原酶阳性，淀粉水解阳性，明胶水解阳性，分解酪蛋白阳性，不产生硫化氢和吲哚，最适生长温度30℃，最适pH为7.0。2、 用权利要求l所述用于防除连作烟草青枯病的拮抗菌所生产的微生物有机肥料。3、 根据权利要求2所述的防除连作烟草青枯病的微生物有机肥料，其特征在于该肥 料中分别含有lXl(^个/g以上的拮抗菌N几-25和N几-14、全氮质量比含量为4~5% ，全 氮中质量比90%以上为有机氮，总氮磷钾养分质量比为6 10%、有机质质量比含量为30 35%。4、 权利要求2或3所述防除连作烟草青枯病的微生物有机肥料的生产方法，包括1)将权利要求1所述...
【专利技术属性】
技术研发人员：沈其荣，刘艳霞，杨兴明，徐阳春，沈标，
申请(专利权)人：南京农业大学资产经营有限公司，
类型：发明
国别省市：84[中国|南京]
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