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一种可记忆瞬态热刺激的重组菌株的构建方法及其应用技术

技术编号:41497209 阅读:26 留言:0更新日期:2024-05-30 14:41
本发明专利技术涉及一种可记忆瞬态热刺激的重组菌株的构建方法及其应用,该方法包括:在表达菌株中敲入群体感应分子酰基高丝氨酸内酯AHL响应启动子PLasI及其所调控的T7RNAP基因,并导入热激响应模块ci857‑PR‑FourU调控的信号分子表达基因LasI、协同蛋白基因LasR,以及受T7启动子调控的报告基因,得到可记忆瞬态热刺激的重组菌株。将所述重组菌株放置于37℃的培养条件时,菌株响应温度并积累信号分子AHL,达到阈值后诱导T7RNA聚合酶,以触发报告基因的表达;该重组菌株可感知热刺激并放大信号输出,具有表达时间可控,表达丰度可控,记忆热刺激信号的特点,由于热刺激的记忆功能,极大改善传统热激系统的热休克反应,具有良好的生物工程应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物工程,具体涉及一种可记忆瞬态热刺激的重组菌株的构建方法及其应用


技术介绍

1、考虑到细胞在生长和生产之间不可避免的造成资源分配的冲突,大部分生产模式需要将生长生产相分离。利用诱导型启动子,在细胞生长到对数期后进行诱导生产,以获得更高的生产力。然而,在大规模的工业生产中,诱导剂的大量使用需要更高的成本,不同的诱导剂还对细胞存在毒性、难以降解、污染环境等问题。热诱导启动子仅需改变物理条件且不额外添加化学诱导物,使其后续在目标产物移除外源添加物、产品提纯方面有着巨大的优势,常用于生物制药行业中生产一些药物级别的蛋白质或者人类所需的产品,如胰岛素、肿瘤坏死因子、重组人生长激素等。凭借着热激系统诱导成本低、操作简单的优势,ci857调控模块也常应用于代谢调控中。

2、然而传统热激响应模块存在着一定的问题,如高温(42℃)响应过程中外源蛋白过表达伴随着高温会加剧热休克反应,外源蛋白聚集形成无酶活的包涵体比例上升,这极大影响工程菌的产品后续蛋白折叠结构复原的成本。除此之外,随着温度上升,细菌通过sigma32因子而上调至少105个基因来保本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种可记忆瞬态热刺激的重组菌株的构建方法,其特征在于,包括:

2.如权利要求1所述的构建方法,其特征在于,所述受T7启动子调控的报告基因为绿色荧光蛋白基因eGFP。

3.如权利要求1所述的构建方法,其特征在于,所述表达菌株为大肠杆菌BW25113菌株。

4.如权利要求3所述的构建方法,其特征在于,在所述大肠杆菌BW25113菌株的CusS位点敲入所述群体感应分子酰基高丝氨酸内酯AHL响应启动子PLasI及其所调控的T7RNAP基因。

5.如权利要求1所述的构建方法,其特征在于,所述信号分子为铜绿假单胞菌中的信号分子AHL。

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【技术特征摘要】

1.一种可记忆瞬态热刺激的重组菌株的构建方法,其特征在于,包括:

2.如权利要求1所述的构建方法,其特征在于,所述受t7启动子调控的报告基因为绿色荧光蛋白基因egfp。

3.如权利要求1所述的构建方法,其特征在于,所述表达菌株为大肠杆菌bw25113菌株。

4.如权利要求3所述的构建方法,其特征在于,在所述大肠杆菌bw25113菌株的cuss位点敲入所述群体感应分子酰基高丝氨酸内酯ahl响应启动子plasi及其所调控的t7rnap基因。

5.如权利要求1所述的构建方法,其特征在于,所述信号分子为铜绿假单胞菌中的信号分子ahl。

6.如权利要求1所述的构建方法,其特征在于,所述工程...

【专利技术属性】
技术研发人员:袁吉锋陈浩锋
申请(专利权)人:厦门大学
类型:发明
国别省市:

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