一种重组透明质酸酶的制备方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种重组透明质酸酶的制备方法及其应用，属于酶工程技术领域，所述方法包括：菌体破碎，预处理，纯化；所述纯化，采用AKTA蛋白纯化系统，利用镍柱亲和层析法进行纯化，收集洗脱峰，然后经过浓缩换液，得到透明质酸酶酶液；所述层析程序为：平衡，NiA buffer 5CV；上样；漂洗，10%NiB buffer 10CV；洗脱，50%NiB buffer 5CV；本发明专利技术利用纯化后的高酶活透明质酸酶，酶解大分子透明质酸钠，制备低分子量及寡聚透明质酸钠，制备的透明质酸酶液发酵周期短，适用于工业化大量制备透明质酸酶，纯化后的透明质酸酶酶活高，适用于工业化生产制备低分子量及寡聚透明质酸钠。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于酶工程，具体涉及一种重组透明质酸酶的制备方法及其应用。

技术介绍

1、透明质酸(hyaluronic acid，ha)又名玻璃酸，是人体中重要的成分，由n-乙酰氨基葡萄糖(glcnac)和d-葡萄糖醛酸(glca)二糖重复单位通过β-1,4-糖苷键和β-1,3-糖苷键构成的无分支结构的高分子酸性黏多糖，具有很强的亲水性和非常好的保湿性能，广泛存在于皮肤、软骨、关节、玻璃体等生物组织中，具有重要的生理学功能。根据其分子量不同可以分为高分子量ha(hmwha)和低分子量ha(lmwha)，hmwha能够抑制内皮细胞的迁移，具有抗血管生成活性，促进人体伤口愈合；lmwha能够促进内皮细胞的分化，抗细胞凋亡，促进软骨、内皮等细胞的迁移，还具有抗炎的作用。ha以其独特的理化性质，在医学和药学研究方面发挥了重要的作用。

2、目前低分子量ha在制备时，主要是通过物理、化学和酶等降解方法将大分子透明质酸降解为低分子量ha。但是物理降解法通常得不到超低分子量的ha，化学降解法可能会导致制备的低分子量ha产品中有化学试剂的残留，并且可能会对透明质酸单本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种重组透明质酸酶的制备方法，其特征在于，包括：菌体破碎，预处理，纯化；

2.根据权利要求1所述的重组透明质酸酶的制备方法，其特征在于，所述菌体破碎，将重组大肠杆菌进行高密度发酵培养，得到发酵液，发酵液经破碎后，得到破碎液。

3.根据权利要求1所述的重组透明质酸酶的制备方法，其特征在于，所述预处理，将破碎液进行第一次离心收集沉淀，得到菌泥，按照菌泥：NiA buffer为1:10-20重悬；高压破碎；对破碎液进行第二次离心收集上清；上清液抽滤除杂，得到重组菌上样液。

4.根据权利要求3所述的重组透明质酸酶的制备方法，其特征在于，所述预处理中，第一次...

【技术特征摘要】

1.一种重组透明质酸酶的制备方法，其特征在于，包括：菌体破碎，预处理，纯化；

2.根据权利要求1所述的重组透明质酸酶的制备方法，其特征在于，所述菌体破碎，将重组大肠杆菌进行高密度发酵培养，得到发酵液，发酵液经破碎后，得到破碎液。

3.根据权利要求1所述的重组透明质酸酶的制备方法，其特征在于，所述预处理，将破碎液进行第一次离心收集沉淀，得到菌泥，按照菌泥：nia buffer为1:10-20重悬；高压破碎；对破碎液进行第二次离心收集上清；上清液抽滤除杂，得到重组菌上样液。

4.根据权利要求3所述的重组透明质酸酶的制备方法，其特征在于，所述预处理中，第一次离心的转速为7000-9000rpm，时...

【专利技术属性】
技术研发人员：褚洪官，廉少杰，贾丙沂，郑德强，康传利，刘磊，王春喜，李庆，杜帅，汤丽伟，张美霞，刘蔷，张建，毛子寒，李姗姗，
申请(专利权)人：山东焦点福瑞达生物股份有限公司，
类型：发明
国别省市：